金黄色葡萄球菌对青霉素耐药蛋白的初步研究文献综述

 2023-01-05 19:13:48

一丶拟研究或解决的问题

A. 熟练掌握微生物学相关实验的原理与步骤。

B.通过测量青霉素对大肠杆菌最低抑菌浓度MIC值，测出其1/2MIC值用两种方法诱导大肠杆菌使其成为耐药菌株，然后分别提取全菌蛋白，用吸附、透析、Ni柱等方法进行纯化，分别用二维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，比较这两种电泳方法有何不同，对所得胶图利用ImageMaster5.0软件进行分析。找出耐药株与敏感株的差异蛋白进行比较。

C.由亲本敏感菌株出发，通过药物诱导得到对不同抗生素耐药的耐药菌株，确保能够得到性状稳定遗传的菌株；对提取菌体蛋白的方法和双向电泳条件进行优化，力求得到最理想的分离蛋白图谱；对提取的菌体蛋白的纯化过程要尽量减少蛋白的流失；对差异蛋白点进行准确酶切与分离，对凝胶成像的图谱进行质谱分析得到蛋白质的准确信息，希望发现新的耐药蛋白。

二丶研究目标

旨在发现新的耐药相关蛋白，以期在蛋白质水平上更加系统化地阐明金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药机制，推测潜在的抗菌药物作用新靶点，为开发新型抗菌药物奠定基础，也为之后研究细菌对其他类抗生素耐药的蛋白质组提供理论指导。

三丶实验基本内容与研究手段

A.活化菌种：将冰箱里冻存的金黄色葡萄球菌菌种接种于事先灭菌备用的固体培养基中，划好平板放在培养箱中培养8到10小时。

B.挑取单菌落：从划好平板的固体培养基挑取金黄色葡萄球菌单菌落接种于MH液体培养基中。

C.测量青霉素对金黄色葡萄球菌的MIC值：倍比稀释青霉素，用96孔板测其MIC值。

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