开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
研究内容及意义:
高血压病,是人类心脑血管疾病中发病率最高的一种疾病,常引起严重的心、脑、肾并发症,是目前造成人类心脑血管疾病死亡的主要原因之一。
由于高血压病因复杂,对于高血压发病机制和抗高血压药物的研究一直是医药界的重点课题。中药具有整体调节和个体化治疗的特点,在改善高血压病临床症状、保护靶器官等方面具有独特的优势。
高血压多以血管内皮细胞为重点对象,研究其发病机理。血管内皮细胞损伤及一些药物的保护机理已成为研究心血管疾病的热点,而其新的前沿是研究细胞信号转导途径和相关功能蛋白质的分离与鉴定,人们正在不断地开发新药物以便能对血管内皮细胞进行有效保护。
天麻和钩藤是治疗高血压疾病的优良中药,在药效学和临床方面做了大量的研究工作,临床应用非常成功,但作用机制的研究仍然不够深入,缺乏利用现代技术手段的药理研究,阻碍了中药现代化的进程。现代药理的研究已经进入到受体、信号转导水平,药物作用细胞信号分子的表达方式和信号转导路径,为寻找新药和解释药物作用效应提供直接的证据。
本论文研究天麻有效成分天麻素和钩藤有效成分钩藤碱的配伍对血管内皮细胞的保护效应机制,从细胞和分子水平、信号转导途径解释天麻素/钩藤碱配伍的药理作用。一方面,为天麻素/钩藤碱的二次开发提供科学理论依据,促进该药的国际化步法,对该药物的现代化具有重要的现实意义;另一方面为其他中药的现代研究、二次开发探索新的研究思路和方法。
研究手段:
1、细胞培养:本论文以人脐静脉血管内皮细胞ECV304为研究对象,用同型半胱氨酸(Hcy)损伤细胞,为研究天麻素/钩藤碱降血压机制研究建模。原理:Hcy是心血管疾病的独立危险因子,其可能机制与其影响了eNOS和caveolin-1的细胞内的相互作用有关,因此用其处理细胞,构建了细胞损伤模型。
2、采用MTT法测定药物的细胞毒性:MTT实验是检测细胞活力的实验方法,由于细胞活力与细胞数呈正相关,因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理:活细胞有琥珀酸脱氢酶,将MTT还原成棕褐色沉淀。
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