抗体Fab片段的表达研究文献综述

 2023-01-31 22:28:29

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

本课题研究的内容

利用分子克隆手段将目的Fab基因导入PETDuet H6-sumo载体后，转入宿主菌中表达，Ni柱纯化，最后用ULPI蛋白酶切去除his-sumo标签，得Fab蛋白片段。

①从大肠杆菌中提质粒PET22b-Fab（PET22b-Fab重组载体是事先已构建好的），用BamHI和NotI酶切得Fab基因片段，并将此片段导入PETDuet H6-sumo载体，形成重组质粒 PETDuet H6-sumo-Fab。

②将重组载体转入B21，T7菌中，培养并用IPTG诱导表达，并优化其培养条件。

③SDS-PAGE检测，并用Western Blot鉴定。

④采用周质表达策略，通过超声破碎和酶解法来提取目的蛋白his-sumo-Fab。

⑤由于此蛋白带His6标签，可用Ni柱纯化。

⑥从克隆菌株Top10菌中提带ULPI蛋白基因的重组质粒，将之转入BL21菌中诱导表达。用上述方法提取、纯化，得ULPI蛋白。

⑦SDS-PAGE检测，并用Western Blot鉴定。

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