开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、课题的研究背景、意义和目的
长链非编码RNA通常是指长度大于200个核苷酸的非编码RNA转录本。由于缺少功能注释,这些RNA转录本在发现后的很长一段时间内,并未得到研究人员的关注。直到2007年这种状况才有所改变,斯坦福大学的Rinn等报道了一条2.2 kb长的功能性长链非编码RNA基因(HOTAIR),研究发现HOTAIR RNA可以与蛋白复合体polycomb相互作用,修饰染色质,抑制HOX基因的转录,并进而调节生物体的生长发育。自此以后,越来越多的研究人员开始关注长链非编码RNA的鉴定和功能研究,发现了大量具有重要生理病理功能的长链非编码RNA基因,使得人们对长链非编码RNA的认识出现了质的飞越。目前,功能性长链非编码RNA的鉴定、尤其是效应机制研究还处于起步阶段,前景未可限量。
研究发现,长链非编码RNA的表达或功能异常与人类疾病的发生密切相关,其中就包括癌症、自身免疫性疾病、退行性神经疾病在内的多种严重危害人类健康的重大疾病,具体表现为长链非编码RNA在序列和空间结构上的异常、表达水平的异常、与结合蛋白相互作用的异常等。所以在自身免疫性疾病的研究中,对相关的长链非编码RNA的研究也成为一个热点。
在前期中,我们已经筛选得到了一条与自身免疫性疾病相关的长链非编码RNA,所以,此次的课题目标是用Q-PCR的方法来验证EAE小鼠模型中,不同组织中这条长链非编码RNA的表达差异,为以后该长链非编码RNA成为自身免疫性疾病的治疗靶点或者疾病的检测指标奠定基础。
二、课题研究的主要内容
1.EAE小鼠模型的建立,通过MOG35-55诱导,皮下多点乳剂注射,联合 p-toxin眼眶静脉注射免疫C57小鼠。
2.选取正常组、模型组及相应的给药组,进行脾脏总RNA的抽提及逆转录。
3.根据前期生物学信息预测结果,结合Q-PCR的方法验证筛选到的长链非编码RNA的表达差异。
三、研究难点
