烟草NbRCD1基因的酵母载体构建文献综述

 2022-08-07 10:14:37

烟草NbRCD1基因的酵母载体构建

摘要：为构建NbRCD1蛋白的酵母双杂交的诱饵载体，本研究以烟草基因组RNA为模板，通过反转录成cDNA，利用PCR方法扩增得到烟草NbRCD1基因的编码序列,经一步法克隆构建pGBKT7（BD）-NbRCD1诱饵质粒，质粒转化大肠杆菌trans1-T1感受态后经Kan 抗性筛选、双酶切、PCR 反应及测序验证其正确后。结果显示，诱饵质粒pGBKT7（BD）-NbRCD1插入片段大小为1800bp，且未发生基因突变。综上表明，我们正确构建了NbRCD1基因酵母双杂交诱饵载体pGBKT7（BD）-NbRCD1，为进一步利用酵母双杂交技术筛选与NbRCD1基因互作的宿主蛋白及功能研究提供基础，探究NbRCD1蛋白功能及分子机制奠定了基础。

关键词：烟草； NbRCD1基因； 载体构建；pGBKT7（BD）载体

一、文献综述

1.1课题背景

随着时代发展，我国科学技术发展越来越迅猛，对蛋白质进行不断深入的研究，蛋白质作为人体多种行为的承载体，生物遗传物质最终的表达方式，在研究中越来越占具重要地位，近年来，蛋白质的研究一直处于欣欣向荣的发展阶段，其研究方法，系统也在不断完善发展。但是人们在对蛋白质进行解析过程中，由于蛋白质半衰期短，易变性等特点，要想直接对蛋白进行研究是非常棘手的，需要从DNA或者RNA的序列来研究，从而了解作物最终承载体蛋白质的作用。分析蛋白质在生物系统中的相互作用关系，对于了解生物系统中蛋白质的工作原理，了解疾病等特殊生理状态下生物信号和能量物质代谢的反应机制，从大分子水平上探讨生物发生的重要机制以及了解蛋白之间的功能联系都有重要意义。

1.2研究现状

最近的研究表明，在蛋白质相互作用功能上的研究中，酵母双杂交技术占据了一席之地，通过构建pGBKT7（BD）和AD双元表达载体，用酵母双杂交技术捕捉诱导蛋白，具有多种优点：1、融合体蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行，保持天然的折叠状态的蛋白质，其相互作用更接近于体内的真实水平。2、酵母双杂交技术的敏感度非常高，蛋白质之间结合常数低至1mmol/L时都可以被侦测。3、在筛选文库时，双杂交系统能够得到编码互作蛋白的基因序列，省略了其它体外检测蛋白互作方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。所以此次技术对于蛋白质研究上具有重要的推进作用。

剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付

发小红书推广免费获取该资料资格。点击链接进入获取推广文案即可： Ai一键组稿 | 降AI率 | 降重复率 | 论文一键排版

您可能感兴趣的文章