一、课题目的
研究表明,蛇毒中存在具有抗菌活性的多肽,金环蛇和眼镜王蛇中发现cathelicidin类似物,具有广谱抗菌活性,尤其是针对革兰式阴性菌,并且眼镜王蛇蛇毒抗菌肽OH-Cath30溶血性低,抗菌活性不受金属离子及黏蛋白影响。然而实验室前期研究发现OH-Cath30在血浆中抑菌时间只有30min左右,因此本实验希望可以将OH-Cath30制成缓释制剂,延长作用时间,将来或可成为新型抗菌药物。
近年来,科学家用各种材料合成纳米给药载体,如白蛋白为基础的纳米控释载药系统,荧光纳米药物传递系统等,而壳聚糖由于其在人体内无毒无免疫原性,不溶血,可自然降解且有抑菌作用,目前得到广泛应用。而改良后的羧甲基壳聚糖和羟甲基壳聚糖可以促进皮肤伤口愈合,疤痕修复。因此,本实验将用壳聚糖包载蛇毒抗菌肽并研究其作用效果,有望于制成新型伤口修复类药物。
二、研究内容和手段
本实验将用不同浓度壳聚糖包载蛇毒抗菌肽制成缓释制剂并研究其缓释作用在动物模型和细胞水平的表现。
1、材料制备:
将纳米材料壳聚糖溶于去离子水后根据比例加入抗菌肽溶液,混合均匀。经超声,离心后取上清测定未包载抗菌肽含量。沉淀为包载好的抗菌肽,用于后续缓释实验和动物实验。
2、动物实验
取18只昆明小鼠分为三组,A组为生理盐水组(空白对照),B组为抗菌肽缓释剂组,C组为1%头孢哌酮钠(阳性对照)。
适应性饲养几天,在分组小鼠背部剃毛,麻醉后切去0.8cmtimes;0.8cm皮肤,在伤口处涂抹混合菌液,诱导感染,而后在1h,6h,12h,24h时间点在伤口分别涂抹对应试剂,观察小鼠在第1,3,5,10,15,19天时伤口结痂的情况,拍照记录,并在第19天时取皮肤组织制成免疫组化组织切片,观察不同组别皮肤中胶原I,Ⅲ含量。
