硫酸转移酶6-ost-3的表达与纯化文献综述

 2022-12-07 16:41:43

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

1.拟研究和解决的问题

硫酸乙酰肝素（HS）通过与蛋白质的相互作用参与了所涉及到的许多动物生物学功能的调控过程，并在其中发挥了重要作用。作为HS 特殊结构形式的肝素（HP）也在临床上被广泛用作抗凝药物，并在抗癌、抗炎方面显示出极有希望的药用前景。天然的HS/HP 是在糖链长度和磺基化模式等方面具有显著差异的混合物，限制了其结构与功能的进一步阐明和药用价值的进一步开发利用。

硫酸乙酰肝素3-氧-磺基转移酶（6-OST-3）是生物酶法合成活性低分子肝素过程中的关键酶之一。它可以催化生成具有抗凝血活性的硫酸乙酰肝素。酶法合成为化学合成的替代途径新发展起来的化学酶学合成近期取得了明显突破，缩短了合成过程，显著提高了得率，并加快了HS/HP 结构与功能关系的阐明，获得了具有新结构、药用价值更高、抗凝活性可逆的低相对分子质量肝素（LMWH）。本研究对生物合成活性肝素过程中的一个关键酶6-OST-3进行了异源表达，对其诱导表达条件进行了优化，并对表达产物进行了纯化及酶学性质的初步研究，为其大量生产奠定了一定的基础，从而为规模化合成人工硫酸乙酰肝素提供必须的工具酶，并为人工合成硫酸乙酰肝素的反应体系奠定一定的基础。

2.采用的研究手段

①质粒转化：（质粒：pET-28a，卡那霉素抗性，His-tag）CaCl2法制备E.coli BL21(DE3)感受态细胞转化后由抗性平板进行筛选。

②工程菌表达：生长曲线绘制，IPTG诱导表达。

③酶的分离纯化：胞内表达，离心分离菌体，破碎菌体收集粗酶液。镍柱与进行亲和纯化。

④SDS-PAGE凝胶电泳检测蛋白表达。

3.文献综述

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