核酸等温扩增技术检测药物基因组学相关SNP位点的研究文献综述

 2023-01-14 19:53:56

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

核酸等温扩增技术检测氯吡格雷相关SNP位点的研究

一、研究背景

氯吡格雷是目前治疗急性冠状动脉综合征的一种经典抗血小板药物，能降低冠心病患者尤其是支架术后患者的主要不良心血管事件的风险。但是部分患者存在氯吡格雷抵抗。研究认为，氯吡格雷抵抗受多因素影响，CYP2C19基因多态性是最重要的内部因素。CYP2C19*2和CYP2C19*3是亚洲人群最常见类型，CYP2C19基因变异者，氯吡格雷抗血小板效应减弱，不良心血管事件增加。因此，常规检测CYP2C19基因多态性可指导临床上氯吡格雷的个性化用药。

二、目前常用的SNP位点检测方法

迄今有多种基因分型方法,包括PCR-RFLP法、药物探针法、TaqMan、基因芯片、荧光偏振、Pyrosequencing、及Massarray等高通量分析技术。其中PCR-RFLP法是主要的检测技术。

1.PCR-RFLP法

目前,采用最多的分型方法是PCR-RFLP法,主要基于聚合酶链反应和限制性内切酶酶切。采取志愿者血液抽提DNA,PCR扩增相关片段,限制性内切酶SmaI酶切PCR产物,获得有关片段,琼脂糖电泳,与标准标记物对照,明确片段大小,从而明确基因型。该方法对于研究工作是成熟、稳定、准确的，但该方法存在一些不足之处：耗时长。为了保证完全酶切,酶切时间一般长达数小时或过夜,不能及时获得检测结果。影响因素多。特别是酶切过程中,如果温度或离子强度控制不好,就会影响到酶切的结果。不完全酶切会导致A1/A2型的假阳性增加。费用高。内切酶MspAlI的价格比较高,大样本的实验如采用PCR-RFLP方法,将会增加成本。

2.AS-PCR

分离外周血淋巴细胞基因组DNA,分别用一对等位基因特异性(allelespecific,AS)的反向引物与共用正向引物进行PCR扩增,通过电泳分析对应的PCR产物来判断CYP2C19基因型。

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