1-苄基咪唑削弱乳腺癌细胞干性的初步研究文献综述

 2022-12-24 13:55:14

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

拟研究的问题

乳腺癌(BC)是最常见的癌症之一，约占新女性癌症病例的30%。其治疗方案主要包括手术结合放化疗、激素治疗及靶向治疗。然而BC患者的死亡率仍然很高。近几年，有学者提出了癌症干细胞（CSC）学说，并且引起了越来越多的关注。越来越多的研究表明CSC可以引发肿瘤再生、自我更新、迁移、侵袭以及原发性肿瘤的异质性，许多化疗药物的组合治疗乳腺癌干细胞（BCSC）不仅增加了BCSC中标志物的表达，而且还促进了CSC依赖性非干细胞向CSC的转化 。因此，以BCSC为靶点的策略势必为治疗BC提供新的思路。本课题主要探究1-苄基咪唑是否可以削弱BC细胞的干性，主要从以下几个方面来探究1-苄基咪唑对BCSC干性的影响

  1. 实验主要内容:

本实验的研究包括以下几项内容:

  1. 通过MTT法检测1-苄基咪唑对乳腺癌细胞活性的影响；

2、通过实时荧光定量PCR以及western blot检测1-苄基咪唑对乳腺癌细胞中肿瘤干细胞标志分子的表达的影响；

3、通过干细胞成球实验检测1-苄基咪唑对乳腺癌细胞成球能力的影响；

4、通过流式细胞术检测1-苄基咪唑对乳腺癌细胞中CD44 /CD24-干性细胞群比例的影响。

  1. 实验方法:
  2. 通过MTT法检测1-苄基咪唑对乳腺癌细胞活性的影响；

接种细胞：收集对数期细胞，每孔细胞调密度1000-2000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。48h或者72h加入一定浓度的1-苄基咪唑，5%CO2，37℃孵育48h。每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。用PBS冲2-3遍，再加入含MTT的培养液。终止培养，吸去孔内培养液。每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。在酶标仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标, 吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

  1. 通过实时荧光定量PCR以及western blot检测1-苄基咪唑对乳腺癌细胞中肿瘤干细胞标志分子的表达的影响；
  2. 实时荧光定量pcr

1.六孔板每孔细胞中加入1mL的Trizol,用枪头不断吹打3-5min，然后全部转移至无RNA酶的EPP管中。

2.两相分离 每1 ml的Trizol试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。RNA全部被分配于水相中。

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