开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
拟研究的问题：花参子露组方筛选自《本草纲目》中的经典古方，经现代药学研究出最佳组方配比为野菊花：苦参:蛇床子2:1:1，提取出药材精露和抑菌成分配成。其中有效成分主要包括：绿原酸，野菊花总黄酮，野菊花挥发油，氧化苦参碱几种。具有抑菌作用，止痒作用，和润肤作用。适用于特定时期由多种致病菌引起的皮肤问题的护理和清洁，还可用于各种不明原因皮肤干涩和瘙痒的润肤止痒。我们课题组通过建立抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒模型，模拟湿疹中肥大细胞致敏和激发过程，以 Ig E/FcεRⅠ介导的信号通路为核心，探讨花参子露对肥大细胞脱颗粒的影响及发挥药效的可能机制，为花参子露在湿疹乃至变态反应中的合理应用提供基础研究依据。
采用的研究手段：1体外培养RBL-2H3 细胞，对RBL-2H3 细胞经不同抗原组合致敏激发
脱颗粒beta;-HEX的释放率进行比较，并据此对细胞活化脱颗粒的条件进行进一步摸索以建立稳定的抗原诱导细胞脱颗粒模型。2 MTT法检测花参子露RBL-2H3细胞增殖的影响。3检测花参子露对 RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放beta;-HEX的抑制作用。4 ELISA检测花参子露对组胺表达的影响。5荧光显微镜定性观察花参子露对胞内钙离子浓度的影响。6蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测花参子露对P-Lyn、Lyn、P-Syk、Syk。
文献综述：
湿疹的发病机制目前尚未完全阐明，一直是多个领域的研究热点。近年来的研究发现，除了迟发型超敏反应外，Treg细胞、皮肤屏障缺陷、病原微生物定植、基因多态性或变异及某些新发现的炎症介质也与湿疹的发病机制密切相关。近十年湿疹发病机制特别是免疫机制的研究有了进展，为进一步阐明湿疹的机制及研究防治措施提供理论依据。
湿疹是以形态学描述来命名的一种皮肤病，在成人及儿童均有发生，是由多种内外因素引起的一种具有明显渗出倾向的皮炎，皮疹呈多样性，瘙痒剧烈，容易复发。从发病机制看，湿疹是由内外因素共同引起的一种迟发型超敏反应，但其具体发病机制尚未完全阐明。以往的研究表明，湿疹的免疫发病过程大致经历以下几个步骤：①抗原提呈：朗格汉斯细胞(LC)及炎症性树突表皮细胞(IDEC)在湿疹发生时表达FceR I增加，俘获通过受损皮肤屏障侵入的变应原，经过加工处理后，一方面提呈给皮肤T细胞，另一方面迁移到淋巴结激活初始T细胞；②T细胞活化：包括Thl细胞活化及Th2细胞活化。在Th0向Thl分化的过程中，Thl特异性的核转录因子T．bet起着决定性的作用。在Th0向Th2分化过程中，Th2特异性的核转录因子GATA一3起着决定性的作用，其受IL一4R信号调控，并被核因子一KB信号放大；③IgE的产生：变应原特异性的CD4*T细胞与B细胞相互作用，在IL一4和CD40L的作用下，B细胞经历了体细胞高度突变(somatic hypermuta—tion)和抗体类别转换(class switching)，转变为产生变应原特异性的IgE的浆细胞。除了上述免疫反应过程外，近年来的研究发现，以下的一些因素，如辅助性T细胞(Th)、皮肤屏障缺陷、病原微生物定植、基因多态性或变异、某些新发现的炎症介质也参与了湿疹的免疫学发病。
1 CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞研究发现，除了Thl／Th2细胞外，表达叉头蛋白3(Foxp3)的CD4 CD25调节性T细胞(Treg)也参与湿疹的发病机制。Cardona等发现，在超抗原葡萄球菌肠毒素B的刺激下，表达Foxp3的CD4 CD25 抑制性Treg失去其正常的免疫抑制作用，功能性T淋巴细胞被异常激活，提示Treg细胞参与金黄色葡萄球菌感染／定植引起的皮肤湿疹免疫反应机制。Verhagen等口1发现，湿疹患者皮损、镍斑贴部位皮肤中Treg细胞缺如、Thl细胞及其抑制性细胞因子IL一10表达增加。Hijnen等⋯研究发现，Treg在湿疹患者外周血中数量增多。研究显示，湿疹患者CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞归巢能力丧失，无法正常到达靶皮肤发挥抑制作用，引起功能性T淋巴细胞异常激活和皮炎反应。
2 皮肤屏障缺陷。皮肤屏障缺陷在湿疹发病中的作用及机制是近年来湿疹研究的热点之一。摩擦、搔抓、掏耳等物理刺激，治疗耳部疾病的药物中所含的新霉素、苯佐卡因、防腐剂的化学刺激，细菌或真菌感染等因素均可破坏耳部皮肤屏障，引发耳部湿疹。皮肤屏障缺陷程度的主要评估指标是经皮失水(TEWL)。Gupta等发现，TEWL的高低与皮肤屏障缺损严重程度及SCORAD指数评估出的婴儿湿疹(特应性皮炎)严重性相关。通过使用各种方法如保湿剂、保护膜、免疫调节剂等提高角质层水合度及降低TEWL来修复湿疹患者的皮肤屏障，可以减轻湿疹病情严重程度及降低复发率Ⅲ。丝聚合蛋白(FLG)是皮肤屏障的重要成分，是由角质形成细胞分泌的一种蛋白分子。FLG在角质形成细胞向角质层分化过程中，由颗粒层被释放至细胞间隙，其逐渐降解形成的各种氨基酸及降解产物是天然保湿因子中的重要组成部分，对维持正常的皮肤屏障功能有重要作用。湿疹患者皮肤的FLG蛋白表达减少，天然保湿因子含量降低，表皮的保水能力、皮肤弹性及机械性能降低，屏障功能减退，这些改变均为各种微生物及抗原进入体内提供了人口及途径。Oyoshi等在FLG缺失的小鼠模型中观察到皮肤出现湿疹样改变的同时，可检测到表皮IL一17表达增加、血清IgE升高，提示皮肤屏障缺损及IL一17表达异常参与了湿疹免疫反应过程。
3 病原微生物定植细菌和真菌等微生物感染也与湿疹发病有关冉3。感染病原体产生的抗原或代谢产物，可导致皮肤屏障缺陷、表皮免疫反应异常，进而引发湿疹。反之，湿疹体质的患者由于天然免疫异常、抗原肽水平低下、Toll样受体表达缺陷101等原因，容易被病原微生物定植，湿疹的发病概率也增加。近年来，该方面研究最多的，也是比较公认的与湿疹发病关系密切的病原微生物是金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)。湿疹患者的皮损区及邻近外观正常的皮肤(包括耳部皮肤)表面pH值升高，环境由弱酸陛转变为碱性，该pH环境既有利于金葡菌的定植及生长，也会抑制皮肤抗微生物肽(antimicrobialpeptides，AMP)的表达，降低皮肤对外界微生物的抵抗能力，增加金葡菌感染概率。以往的研究发现，定植于皮肤表面的金葡菌通过产生超抗原，诱导T淋巴细胞表皮浸润、IgE产生及嗜碱粒细胞释放组胺，引起持续的皮肤免疫炎症及湿疹样变。研究发现，除了超抗原，金葡菌产生的胞壁酸也与湿疹发病有关。Travers等在体外实验发现，湿疹皮损中的胞壁酸含量足以诱导包括表皮细胞在内的多种细胞表达细胞因子，引起炎症反应。
