开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一．研究背景
CD24是一种高度糖基化的黏附分子，由27个氨基酸组成，在小鼠中主要表达于造血细胞，在胸腺细胞，脑及胰腺的上皮细胞也有表达，在人类血液系统恶性肿瘤与结直肠癌、胰腺癌、肝癌、小细胞肺癌等多种肿瘤组织中过表达，而在正常细胞组织中低表达或不表达。研究表明，CD24与肿瘤细胞的生长，增殖，侵袭[1]与肿瘤转移等方面密切相关。因此，CD24具备被开发为靶标，进行对高表达CD24肿瘤免疫治疗的潜力。相关研究证明，CD24高表达与肿瘤临床分期有关[2]，对CD24的表达抑制可降低上皮来源的肿瘤组织中肿瘤细胞的增殖与浸润能力。
原发性肝癌是我国第三位致死性肿瘤，其中85%~90%为原发性肝细胞癌（HCC）,晚期HCC通常缺少手术指征, 除少数给予局部治疗降低肿瘤负荷, 提高生存质量的姑息治疗外, 主要采用系统性治疗近两年, 随着相关临床试验的开展, 肿瘤免疫治疗因其突出的有效性和安全性, 在中晚期HCC的治疗中受到越来越广泛的关注。肿瘤细胞通过免疫检查点通路，抑制 Ｔ 细胞的效应来逃避免疫监视，导致肿瘤监视和肿瘤识别降低，最终形成免疫逃逸。
近年来，免疫检查点抑制剂 (immune checkpoint blockage, ICB)迅速发展，其主要通过恢复机体受抑制的免疫功能, 达到杀伤肿瘤的作用。近年来，以程序性死亡受体（PD-1）和细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）抑制剂为代表的ICB在晚期黑色素瘤和肺癌等肿瘤中取得了显著疗效[3]。现阶段的ICB主要以PD-1/PD-L1和CTLA-4作为治疗靶点，以免疫检查点PD-1为例，APC及肿瘤细胞表达的PD-L1均可经PD-1/PD-L1信号通路抑制肿瘤抗原特异性T细胞的活化，下调T细胞介导的肿瘤免疫应答。使用PD-1抗体及PD-1受体的配体PD-L1的抗体阻断肿瘤细胞表面异常高表达的PD-L1与免疫细胞表面PD-1的结合, 使肿瘤浸润淋巴细胞得以恢复杀伤活力, 达到杀伤肿瘤细胞的目的。其相关药物目前也已上市，在非小细胞肺癌[4]与黑色素瘤中体现出较好的临床效果，在膀胱癌、肾癌、大肠癌和霍奇金淋巴瘤中也体现出广阔的应用前景。
根据 Reya T等提出的肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)理论[5]，肿瘤组织中仅有少量细胞具有不确定的自我更新能力，多向分化潜能及产生异质性的肿瘤细胞的能力，CSCs 的存在是肿瘤复发、转移、放化疗抵抗的重要原因。在血液恶性肿瘤和实体瘤已经中鉴定出 CSCs。越来越多的证据表明肝癌组织中存在一小部分具有肿瘤干细胞特性的癌细胞，即肝癌干细胞(liver cancer stem cells，LCSCs)。近年来， LCSCs 特异性标记物的鉴定和针对靶向治疗的靶点是研究的热点。
CD24 细胞经研究实验显示具有 CSCs 的特性[6]，其通过 STAT3 介导的干细胞转录因子 NANOG 调控驱动 CSCs，在肿瘤的自我更新、分化和转移过程中发挥重要作用，对患者的临床预后有重要影响。Twist2 － CD24 －STAT3 － NANOG 途径可能是调控肝癌干细胞自我更新的关键。因此CD24可能是HCC治疗中潜在的新靶点。免疫治疗将是继分子靶向治疗后有希望改善患者预后的治疗方式，其中免疫检查点抑制剂是目前取得显著近期客观疗效和改善生存的主要药物研究进展，CD24作为潜在的免疫检查点，其抑制剂可能被应用于表达CD24抗原的肿瘤免疫治疗。
研究显示化疗耐药的肿瘤细胞中 CD24 高表达;在原发性肝癌标本中有少数肝癌细胞表达CD24(0% ～ 16% )，而在非肿瘤性肝组织中则不表达。为进行后续研究，拟通过慢病毒载体将表达CD24表面抗原的基因转染至HCC细胞中，以构建相应稳转细胞系，为后续相关研究进行准备。
本研究通过构建CD24表面抗原慢病毒表达载体，感染SMMC-7221细胞[7]，建立表达CD24的SMMC-7221稳转细胞株，为后续研究奠定基础。
二．研究手段
