开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一.研究的目的
(1)筛选极地真菌,获取活性菌株;
(2)对活性菌株进行次级代谢产物研究,重点寻找结构新颖、生物学活性强的代谢产物。
二.基本内容:以海洋真菌sp-9为研究对象,经过大米发酵培养,发酵产物的收集,浓缩,利用大孔树脂柱层析,ODS柱层析,硅胶柱层析,凝胶柱层析等步骤,然后通过薄层色谱、高效液相色谱、红外光谱或碳谱等技术手段,得到样品的结构特征,检测出其次生代谢产物的种类和结构。
方案:
1.菌种发酵的培养。在预先配置好的大米培养基(12盒)中进行接种,置于适宜的环境中进行发酵。
2.菌种发酵液的收集。取出培养好的菌种,在超净台中向每盒菌种滴入少量乙醇,防止真菌孢子飘散。取出培养基中的样品置于大量杯中,加入1.5倍体积乙醇进行超声处理,约一个半小时,然后分装入小量杯中,继续各超声0.5小时,随后抽滤,保留滤液,再向滤渣中加入1.5倍体积的乙醇进行超声处理,重复三次,收集滤液,弃去滤渣(培养基 菌丝体),共收集的滤液多达7升。
3.菌种发酵液的浓缩。将浓缩后的样品置于旋转蒸发仪中,收集发酵产物,回收95%乙醇。
4.粗提物的分离纯化。装填大孔树脂,将大孔树脂搅拌均匀后缓慢倒入柱子中,将浓缩样品抽滤后缓慢流入大孔树脂,用乙醇洗至流出液无色,用水洗至流出液无乙醇味,在树脂上方放入一团棉花,用胶头滴管沿壁缓慢上样,上样完毕后依此用水,20%乙醇,40%乙醇,60%乙醇,80%乙醇,100%乙醇进行梯度洗脱,依此收集流出液各120ml,最后再依次将流出液旋转蒸发浓缩,收集入小玻璃管中。
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