开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
课题来源:自拟课题
课题依据:汉黄芩苷是从黄芩系唇形科植物黄芩的干燥根中天然提取的黄酮类化合物,在临床中属于常用中药。实验研究表明,汉黄芩苷具有一般黄酮类化合物的抗炎、抗病毒等生物活性。
炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,IBD)是由免疫反应失调所致的以持续肠道炎症为特征的一类疾病,包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)[1]。IBD的发病机制尚未完全阐明,可能与免疫、感染、遗传、环境等因素有关。白细胞介素IL-1beta;是结肠炎发病中的重要致炎因子,NLRP3炎症小体可调节IL-1beta;的分泌。NLRP3炎症小体具有广泛的免疫调节和抗微生物作用,与自身免疫病和感染性疾病的关系正受到广泛关注。有研究发现NLRP3-/-小鼠对DSS诱导的结肠炎耐受,其机制可能与结肠促炎细胞因子IL-1beta;、IL-18等产生减少有关[2]。由此可知针对NLRP3的靶向治疗可能是有前景的防治IBD的方法之一。
在本实验中,通过ELISA、WesternBlot蛋白分析和免疫沉淀实验,探讨汉黄芩苷体外抑制LPS ATP刺激的PMA分化的THP-1细胞IL-1beta;的分泌是否与其抑制炎症小体NLRP3激活有关,初步评价汉黄芩苷防止DSS诱导的小鼠结肠炎的药效,从而探讨其作用机制。
主要解决的问题:
1.汉黄芩苷抑制LPS ATP刺激下人单核巨噬细胞THP-1IL-1beta;分泌的药效学研究
1.1体外细胞培养[4]
将THP-1细胞按适当浓度接种于培养瓶中,加入含100U/mL的青霉素、100U/mL的链霉素、10%胎牛血清的1640培养液,置于37℃恒温、5%CO2及饱和湿度的培养箱中培养,细胞呈悬浮生长。每2~3天传代一次,传代时吹打均匀,根据所需细胞量平均分配移入新培养瓶中,适量添加完全培养液。
1.2PMA诱导THP-1分化成巨噬细胞
