拟研究的问题：
麦冬（Ophiopogon japonicus）在传统滋阴中药中占有非常重要的地位。应用现代科学技术进行的实验研究发现，麦冬中所含主要化学成分有皂苷类、黄酮类、氨基酸类、多糖类及挥发油等，其中皂苷类化合物是其药材质量控制的关键性指标，更是麦冬发挥广泛药理作用的极其重要的活性成分,具有显著的抗炎、抗肿瘤和心血管保护作用。课题组前期研究已证实麦冬皂苷可有效地抑制TNF-alpha;或PMA诱导的HL-60与内皮细胞的粘附作用。本课题拟考察麦冬皂苷对TNF-alpha;诱导血管内皮细胞紧密连接损伤的保护作用，并初步探讨可能的作用机制。为麦冬皂苷临床治疗动脉粥样硬化提供进一步的实验依据。
采用的研究手段：
（一）TNF-alpha;诱导C57BL/6小鼠血管炎症模型的建立
C57BL/6小鼠随机分为4组，每组5只，分别为空白组，模型组，给药组，阳性药组。给药组和阳性药组分别每天给予DT-13(4mg/Kg)和地塞米松连续(5mg/Kg)，连续灌胃13天，空白组和模型组给予等剂量的生理盐水。第7天起，灌胃1h后，模型组，给药组，阳性药组均腹腔注射TNF-alpha;（0.5mg/Kg）连续7天，空白组给以等剂量的生理盐水。第13天，腹腔注射2h后，小鼠眼球取血，静止30min后，3500rpm，4℃离心15min，去血清-70℃储存。小鼠4%多聚甲醛灌注，取腹主动脉血管置于4%多聚甲醛中2h，取出置于40%蔗糖溶液中脱水12h，取出血管包埋，冰冻切片-70℃保存。
（二）体内：免疫荧光检测小鼠血管内皮细胞紧密连接蛋白(ZO-1)的形态分布
取上述冰冻切片，用PBS漂洗3次，用多聚甲醛水溶液孵育，冷PBS漂洗3次，牛血清白蛋白室温下封闭1 h，鼠抗ZO-1一抗(1：100)孵育过夜，PBS漂洗3次，然后以FITC标记的羊抗兔IgG二抗(1：200)避光孵育1h，漂洗干净后用激光共聚焦显微镜观察并记录。
（三）体外：免疫荧光检测 ZO-1蛋白在HUVECs细胞的表达及分布情况
无菌盖玻片置于6孔板中，接种细胞。待细胞融合，用含 0. 5%胎牛血清的M199培养基饥饿细胞12 h，麦冬皂苷孵育细胞 1h，TNF-alpha;刺激细胞4h。去除培养基，用 PBS洗3次，用4% 多聚甲醛室温下固定细胞 10min。然后，PBS洗3次，每次5min。用5%牛血清白蛋白封闭 1 h，一抗( 1 ∶100)孵育，4℃过夜。PBS 洗3次，每次 5min，加 FITC 标记的二抗( 1∶ 100) ，室温下避光孵育1 h。PBS洗3次，加 DAPI 染核5 min，洗3次。用50%甘油封片，荧光显微镜下观察荧光强度，用激光共聚焦显微镜观察成像。实验重复至少3次。
（四）麦冬皂苷对TNF-alpha;诱导内皮细胞通透性的影响
