开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
课题背景：
非酒精性脂肪肝（NAFLD）是一种无过量饮酒史，以肝实质细胞脂肪变性和蓄积为特征的临床病理综合症，经常与Ⅱ型糖尿病、高脂血症等并发。其疾病谱有从单纯性脂肪肝到脂肪性肝炎（NASH），甚至可能严重至肝硬化和肝细胞癌。由于近年来NAFLD发病率不断地的提高已经在全球达到了流行病的水平。
NAFLD的发病机制仍是个迷，对此有个“二次打击”学说，认为“第一次打击”是脂肪堆积，“第二次打击”是氧应激和异常细胞因子作用导致的肝脏坏死性炎症和纤维化。而近期又有研究发现，随着胰岛素抵抗发病率的增高和抗胰岛素抵抗药物对肝脏脂肪堆积的改善，胰岛素抵抗可能才是真正的“第一次打击”。肝脏脂肪堆积导致胰岛素清除率下降，形成脂肪堆积和胰岛素抵抗的恶性循环。
氧应激在脂肪储积的肝脏中增强，反应性氧产物随非酒精性脂肪肝加重而增多。脂质过氧化在非酒精性脂肪肝中广泛存在。因此，氧应激在非酒精性脂肪肝发病机制中的作用不可忽视。反应性氧产物与膜磷脂的不饱和脂肪酸反应形成脂质过氧化，而产生的脂质过氧化产物又可改变线粒体DNA，抑制呼吸链的电子传递，进一步增加反应性氧产物和脂质过氧化产物的生成，形成一个恶性循环。
大量研究表明，NAFLD通常是源于AMP激活的蛋白激酶（AMPK）受抑制，这是一种调节肝脏脂质代谢的酶，包括脂质的生物合成和吸收，脂肪酸氧化，甘油三酯和胆固醇的代谢等。如今，AMPK被广泛公认为NAFLD的治疗的一个潜在靶点。另一个反应性氧产物产生的场所是微粒体，游离脂肪酸是CYP450-2E1的诱导剂，后者在反应性氧产物和脂质过氧化产物的产生过程中具有重要作用。脂肪酸在微粒体内氧化形成二羟基脂肪酸，进一步被过氧化物酶降解，产生短链酰基辅酶A和酰基辅酶A。酰基辅酶A可作为肝内脂肪酸氧化系统某些酶的配体，具有控制基因诱导的作用，也可促进肝内合成解链蛋白。解链蛋白可抑制肝细胞凋亡，增加肝细胞对“二次打击物”如内毒素或肿瘤坏死因子的易感性。
小檗碱（Berberine，BBR），又名黄连素，是一种异喹啉类生物碱，具有清热解毒作用。临床上常用于肠道细菌感染性疾病的防治。近年来人们对小檗碱研究非常活跃，发现小檗碱除了上述的抗菌活性外，还具有降血糖、降血脂、抗炎、抗病毒和抗肿瘤等药理作用。其作用机制主要涉及到胰岛素信号通路和AMPK信号通路，以及肠道菌群、肝脂转运等多方面，但其治疗机制仍需进一步探索。我们的研究发现其除了消除ROS外，还能通过激活AMPK诱导肝脏中NT-PGC-1alpha;和PGC-1alpha;表达。人们在研究小檗碱体内代谢过程中，发现小檗碱在体内经肝脏代谢亦可产生去亚甲基小檗碱DMB，本实验室之前的工作已经研究证明DMB在激活AMPK治疗NAFLD方面具有重要作用。然而，由于DMB溶解度低，从而影响其生物利用度，实验室通过化学合成的方法对其结构进行改造，获取改造后目标产物MA。本实验的主要意义在于揭示MA进入体内后的结构变化，研究MA是否通过激活AMPK诱导肝脏中NT-PGC-1alpha;和PGC-1alpha;的表达，从而调节肝脏糖脂代谢。为治疗NAFLD提供新思路。
实验流程：
1. 细胞培养与处理：HepG2细胞孔板培养，设置对照，用不同浓度给药对细胞孵育，MTT检测细胞活度，Western Blot 检测孵育不同浓度MA及不同时间的细胞并收集。
细胞油脂含量测定：HepG2细胞在软脂酸钠存在或缺少MA下孵育24h，孵育后用PBS清洗两遍再用福尔马林固定60min，清洗后油红O避光染色60min，用超净水清洗后显微镜摹制。
