1、拟研究和解决的问题
肿瘤坏死因子家族中，有一种重要的免疫调节因子，它存在两种形式：一是膜结合形式，其二是可溶性蛋白的形式并且它能够调节免疫细胞的分化和生长。Bolt蛋白是这种因子的一种受体，它是一种非糖基化的Ⅰ整合膜蛋白，主要在成熟的B淋巴细胞中表达。Bolt受体表达在B细胞的表面，以相对较小的结合域与BlyS发生特异性结合，能够与增殖诱导配体APRIL和B细胞激活因子BAFF两种配体相结合[1]。
研究表明，在人的恶性骨髓瘤细胞系中，bolt并不在细胞表面表达，而是在核外周部分重叠的类似于高尔基结构的周围表达。在稳定的或短瞬的转染的细胞中，bolt既存在于细胞的表面，也存在于核外周，类似于高尔基的结构上。免疫共沉淀实验中发现，在转染细胞中，bolt能够与肿瘤坏死因子受体相关因子TRAF1、TRAF2和TRAF3这三种连接蛋白相互作用。Bolt对于长寿命的骨髓瘤淋巴细胞的生存是不可或缺的。在一些细胞中，bolt的过量表达能够激活一些蛋白激酶，与某些疾病的产生有关。
多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是恶性浆细胞病中最常见的一种类型，又称骨髓瘤、浆细胞骨髓瘤或Kahler病。虽然早在1844年对此病已有人作出描述，但直到1889年经Kahler详细报告病例后，多发性骨髓瘤才普遍为人们所了解和承认。多发性骨髓瘤的特征是单克隆浆细胞恶性增殖并分泌大量单克隆免疫球蛋白。恶性浆细胞无节制地增生、广泛浸润和大量单克隆免疫球蛋白的出现及沉积，正常多克隆浆细胞增生和多克隆免疫球蛋白分泌受到抑制，从而引起广泛骨质破坏、反复感染、贫血、高钙血症、高黏滞综合征、肾功能不全等一系列临床表现并导致不良后果。淋巴因子细胞因子、生长因子、白细胞介素、集落刺激因子与骨髓瘤的关系在近年来受到重视。研究证实，细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-10、干扰素(INF)-alpha;、beta;细胞活化因子（BAFF）等促进MM细胞生长及介导细胞耐药,且BAFF的表达影响MM细胞的存活、增殖、转移及耐药。异常的BAFF表达可调节MM细胞的增殖，表明其受体在促进肿瘤生长的过程中发挥一定作用。有研究报道，BAFF-R是B细胞发生及存活的主要受体，TACI在调节B细胞稳态及自身免疫方面起重要负调控作用，而MM标本中bolt的持续表达表明bolt可作为调控恶性浆细胞促存活途径的主要受体[2]，可将上述分子作为治疗MM的潜在靶点。
2、采用的研究手段
（1）噬菌体展示筛选抗bolt蛋白单链抗体
采用鼠源单抗噬菌体库筛选抗bolt蛋白的单抗,将筛选出的scFv进行His标签标记重组构建,并进行镍柱纯化，通过原核表达发酵，将单链抗体保存，为接下来的活性研究进行准备。
（2）十二肽库筛选bolt蛋白的抗原表位
噬菌体展示随机肽库技术是研究抗原表位及其它配体受体相互作用位点的强有力工具。利用各种各样噬菌体随机肽库可以模拟线性、构象性甚至是非蛋白质抗原表位。本实验主要通过M13噬菌体十二肽库文库扩增的方法，一共进行四轮淘洗来获得bolt蛋白的抗原表位。第四轮淘选后无需扩增，仅测定洗脱后噬菌体滴度，其余洗脱物4℃贮存[3]。
