一、拟研究概况
附子为毛茛科植物乌头aconitum carmichaeli debx.的子根的加工品，具有回阳救逆，补火助阳，逐风寒湿邪之功效。生附子既是附子炮制的原料, 也可直接入药。主治亡阳虚脱，肢冷脉微，阳痿，宫冷，心腹冷痛，虚寒吐泻，阴寒水肿，寒湿痹痛等。《本草汇言》云：“附子，回阳气，散阴寒hellip;hellip;凡属阳虚阴极之候，肺肾元热证者，服之有起死之殊功。”目前研究附子具有强心、消炎、镇痛、抗癌等广泛的药理作用。但是附子和乌头是有毒植物，误食或用药不慎可中毒，甚至死亡，临床上中毒者并不少见。
自从20世纪60年代, 我国学者陈首先开始研究附子的化学成分, 随后国内外学者对附子的有效成分进行了深入研究, 现已报道附子的化学成分, 主要是生物碱类物质, 此外还有脂类物质以及多糖等。C19二萜类生物碱是附子的主要化学成分, 按取代基结构不同分为三类: 单酯型生物碱(monoester-diterpenoid alkaloids)、双酯型生物碱(diester-diterpenoid alkaloids)和脂型生物碱(lipo -alkaloids)。双酯型生物碱毒性较大, 其中乌头碱、中乌头碱、次乌头碱的小鼠口服LD50分别为1.8,1.9,5.8 mg/kg。有文献报道利用液相色谱、毛细管电泳和紫外光谱对以上三种双酯型生物碱进行定量分析,以及利用液相色谱与质谱联用研究其体内代谢途径及代谢产物等。化学成分的研究有助于深入了解附子等有毒药材的毒性成分组成, 以及毒性成分的次生产物, 对于安全用药尤为重要。
二、研究方法
整个研究方法分为三部分：生附子提取方法的确立及优化，生附子的成分分析，生附子成分的结构确证。
- 生附子提取方法的确立
依据文献报导初步选择了三种药材提取方法，分别为：
1. 取各批次生附片( 40目) 约5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 加乙醚50mL与氨试液4mL,密塞, 摇匀, 放置过夜。滤过, 药渣加乙醚50mL, 连续振摇1h, 滤过, 药渣再用乙醚洗涤3～4次, 每次15mL, 滤过, 洗液与滤液合并, 低温蒸干。残渣加0.05%盐酸甲醇溶液溶解并定容至5mL, 摇匀, 用0.45m微孔滤膜滤过, 即得供试品溶液。
2.精密称取过60目筛的附子生药材细粉约2g,平行称3份,分别置于200mL三角瓶中,各加25%氨水2mL,润湿30min。精密量取萃取溶剂异丙醇：醋酸乙酯(1∶1)混合液100mL,加至含样品的三角瓶中并称定质量。超声30min后,将此样品瓶放置至室温,再称质量,用萃取溶剂补足失去的质量,混匀后滤过。精密量取续滤液40mL,浓缩至小体积,再将其用萃取溶剂完全转移至一蒸发皿上蒸干。残渣用0.01%盐酸甲醇溶解并定容于2mL量瓶中,摇匀,0.45mu;m微孔滤膜滤过,得供试品溶液。
3.样品粉碎后用乙醇回流提取1.5h，过滤蒸干，后用甲醇溶解，过滤，用氨水调pH值至8～9后经0.45mu;m微孔滤膜过滤后得供试液。
依据酯型生物碱在碱性条件下容易水解, 在酸性条件下相对稳定, 故在1,2法中采用0.05%的盐酸甲醇溶液配制对照品及供试品溶液。
