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课题名称 |
聚戊烯醇对Abeta;-42诱导的阿尔兹海默症认知障碍的治疗作用 |
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毕业论文的内容和意义 |
阿尔茨海默症(Alzheimerrsquo;s disease, AD) 是一种多发于老年群体的神经退行性疾病，约占痴呆总数的 60% - 70% ，严重威胁着老年人的身体健康。多数发病患者均存在记忆力减退、执行力障碍以及行为改变等症状表现，伴随病程延长其认知功能障碍会发生进行性加重状况 [1]。AD 主要的病理学特征包括脑神经元外出现的beta;淀粉样蛋白(Abeta;)的沉积和其进一步形成的老年斑(SP),细胞内过度磷酸化的Tau蛋白导致的神经纤维缠结和神经元的营养坏死等。很多证据表明Abeta;-42 可溶性的寡聚体的神经毒性最强,很可能是 AD 发病的关键因素。如何安全而有效地阻止甚至清除Abeta;-42 毒性肽被认为是预防和治疗AD的有效方法。 聚戊烯醇是天然的类脂化合物，广泛存在于绿色针叶植物和银杏等植物中，其结构特征和生理活性与人体内多萜醇相似，可转化成人体必需的多萜醇 ［2］。郑光耀等的一项研究表明马尾松针叶聚戊烯醇对 Abeta;1-42 诱导的 PC12 细胞损伤具有明显的保护作用 [3]。在另一项研究中显示马尾松针叶聚戊烯醇能明显改善 AD 小鼠学习记忆的能力，表明马尾松针叶聚戊烯醇对 AD 小鼠具有一定的防治作用 [4]。俄罗斯和拉脱维亚医科院利用针叶聚戊烯醇开发了“Ropren”制剂（以云杉和松为原料的聚戊烯醇产品），拉脱维亚医科院和“Biolat”公司按照前苏联卫生部药物委员会“新药用物质临床前毒理试验要求”对针叶聚戊烯醇进行毒理安全评价,实验结果表明,聚戊烯醇对人体安全无毒,无致突变、致畸及致癌作用 [5]。Fedotova 等研究结果显示，用Ropren处理能显著提高由 P 淀粉多肽（ 25-35）诱导遗忘症小鼠的非空间和空间认知能力，说明 |
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毕业论文的内容和意义 |
Ropren 能够缓解AD的认知缺陷[6]。 随着我国人口老龄化的加剧，AD和其他神经退行性病症的患者将会越来越多，关于AD的治疗研究对于减轻患者的痛楚、 降低照料者的负担和国家的社会经济负担都具有重要意义。 |
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研究方案和技术路线 |
1 实验分组及给药
将雄性清洁级ICR小鼠随机分为正常对照组、假手术组、AD 模型组、 姜黄素组(400mg·kg － 1 ) 、 聚戊烯醇低、中、 高剂量组( 20，40，80 mg·kg － 1 ) ， 每组 20 只。将姜黄素按比 2 诱导AD模型 小鼠经腹腔注射 10% 水合氯醛( 4 mL·kg － 1) 麻醉后，固定于脑立体定位仪。无菌条件下操作，沿颅顶中线做 1 cm 纵行切口， 止血， 钝性分离骨膜。参照小鼠脑立体定位图谱，对AD模型组和给药组右侧侧脑室进行定位( A: 22 mm; L: 2 mm; H: 24 mm)，用微量注射器在其两内眦中点及两耳前缘连线中点的连线中点偏右 1 mm 处垂直骨面扎入颅骨， 进针深度为 3 mm， 一次性注射 Abeta;1-42 ( 5mu;L， 含 5mu;g) ，30 s 内缓慢注入侧脑室，并留针30s。假手术组以同样方式向侧脑室注射等量灭菌生理盐水。待小鼠清醒后放回笼中常规饲养。 3 空间学习记忆能力测试(Morris水迷宫) 参照Morris水迷宫实验方法 [7]测量小鼠学习和记忆能力。所用水迷宫为一直径180cm、高55cm的圆形水池，水池内壁被漆为黑色，水深30cm，距池壁35cm处放置一高29cm，直径10cm |
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研究方案和技术路线 |
圆台。实验历时4日(d 1～d 4)，实验前1日让小鼠自由游泳2 min，每天分上、下午两段，每段训练4 次。训练时随机选择一个入水点，将小鼠面向池壁放入水中，记录小鼠寻找并爬上平台所需时间(即逃避潜伏期)，相邻两次训练间隔为60 s。如果小鼠在120 s内未找到平台，须将其引至平台，这时潜伏期记为120s。在d 5最后一次训练后撤除水下平台，在同一入水点将小鼠面向池壁放入水中，测其在120 s内在原平台象限活动时间与总时间比值及跨过原平台相应位置的次数以及小鼠从入水至找到站台的游泳路程。 |
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实验记录 |
马尾松针叶聚戊烯醇对 AD 小鼠定位航行逃避潜伏期的影响
聚戊烯醇对 AD 小鼠定位航行游泳路程的影响 |
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组别 剂量mg/kg |
游泳路程/cm |
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d 1 |
d 2 |
d 3 |
d 4 |
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正常手术组 假手术组 AD模型组 姜黄素组 聚戊烯醇组 聚戊烯醇组 聚戊烯醇组 |
-- -- -- 400 20 40 80 |
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实验记录 |
2.22-3.11 查阅并整理文献资料 3.11-3.25 撰写开题报告 3.25-5.27 进行课题实验，完成毕业论文初稿 5.27-6.8 完成毕业论文终稿，完成毕业论文答辩 |
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研究进度 |
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特色与创新 |
1 姜黄素与纤维状Abeta;有较高的亲和性， 能与纤维状Abeta;结合，使 Abeta;失去稳定性，进而降解。且体外试验中证明了姜黄素能够抑 制Abeta;40的聚集， 同时可以使已聚集的 Abeta; 40 解聚影响Abeta;纤 维的生成影响Abeta;蛋白聚集对已生成 Abeta; 清除作用 [11]，专性作 用于Abeta;，本课题中采用姜黄素为阳性对照组，可以更好的对比 聚戊烯醇对Abeta;-42诱导的AD认知障碍的治疗效果。 2 认知功能障碍目前困扰着全球几千万人口，已经成为一个严重的 社会性健康问题。其对人的影响包括空间定位存在困难、不能协 调完成两种以上任务、 不能跟踪谈话内容、 新知识学习能力下 降等。本课题针对AD认知功能障碍的治疗，不仅针对AD样本， 还可为认知功能障碍中的轻度认知功能障碍 （Mild Cognitive Impairment， MCI）提供一定的帮助。 3 本项目中不仅记录小鼠在Morris迷宫实验中的用时时长，而且 对其行动路线进行精确记录，可以更加直观的观察小鼠游泳的路 线是否清晰、目标是否明确，有利于对小鼠认知功能的研究 分析。 |
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参考文献 |
[1] SimtsLL,LiedorpM,Koenet,etal.EEG abnormalities are associated with different cognitive profiles in Alzheimerrsquo;s disease [J].Dement Geriat Cogn Disord,2011,19(3):1-6.
[2] Chojnacki T，Dallner G. The uptake of dietary polyprenols liver［J］. Journal of Biology Chemistry，1983，258 (2):916-922. [3] 郑光耀，薄采颖，王萌萌，等.马尾松针叶聚戊烯醇对beta;- |
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参考文献 |
淀粉样蛋白诱导 PC12 细胞损伤的保护作用［ J］.中国药 [5] 王成章，叶建中，陈西娟，等.植物聚戊烯醇的理化特性和药
理活性研究进展.生物质化学工程,2009,43（2）：37-42. is a polyprenol preparation from coniferous plants that ameliorates cognitive deficiency in a ratmodel of Betaamyloid peptide -（ 25 -35） -induced anmesia [J］.Phytomedicine，2012，19 （ 5）. [7] 王升武.阿尔茨海默病的临床特征及综合治疗效果的评价，医 学与理论实践，2016,29（3）：319-320. [8] 张伟，胡永杰，武海英，等.改善认知功能的植物多酚研究进 展，世界科学技术—中医药现代化综述，2014，16（11）： 2454-2459. [9] 张佳.红景天苷对Abeta;1-42所致AD模型大鼠认知障碍的干预作 用及机制研究，河北医科大学. [10] 韩丽珠，王文静，褚忠海，等. 轻度认知障碍患者脑脊液中 beta;－淀粉样蛋白42及磷酸化Tau蛋白的水平检测及意义， 实用医学杂志，2014，30（19）：3079-3081. [11] 杨融辉，张宁. 姜黄素对阿尔茨海默病作用机制的研究进展， 东南大学学报(医学版)，2015，34(1) ：152-155. |
