拟研究的问题:天然产物是指动物、植物、真菌等生物本身的组成成分或其代谢产物。目前已经被广泛应用于抗氧化、防衰老、抑菌、抗炎、降血糖、降血压、抗肿瘤等食品或药品的研究领域中。其中，在抗肿瘤方面，是发掘新颖抗肿瘤活性成分的重要源泉，也是有机合成和组合化学的补充。对于天然产物生物活性的发现与研究，目前国内外采用的评价方法主要分为化学方法和生物学方法两种，其中生物学方法又包括体内活性评价（动物实验、临床试验）与体外细胞水平活性评价两种方法。而在实际研究中单纯的化学方法和体内活性评价这两种评价方法由于实验周期较长且开销较大，不适合天然产物活性的初期筛选。因此本课题拟考察从体外细胞水平对天然产物抗肿瘤活性成分进行筛选，从而快速筛选先导化合物，为天然抗肿瘤药物的研究与开发提供进一步的实验依据。
采用的研究手段：本实验拟采用MTT法来检测细胞活力，从而得到天然产物抗肿瘤活性成分对肿瘤细胞的生长抑制率，来考察天然抗肿瘤活性成分的筛选。
- 采用的细胞株和培养基：
细胞株：HepG2,U 2OS,MCF-7。
培养基：DMEM 10%胎牛血清，1640 10%胎牛血清，DMEM 10%胎牛血清。
- 采用的主要试剂：
PBS缓冲液：依次精密称取0.1 g KCl、4.0 g NaCI、0.l g KH2PO4、1.445 g Na2HPO4；加入超纯水溶解并定容至500 ml，用0.22 mu;m滤膜过滤，用封口膜封口，置4℃保存。
0.25 %胰酶：精密称取0.25 g的胰酶粉末，用上述PBS溶解，并定容至I00 ml，过滤除菌，封口膜封口，4℃保存。
噻唑蓝(MTT) ：取MTT 250 mg加入50 ml PBS溶液中，配成浓度为5 mg/ml MTT溶液，过滤分装，-20℃避光保存。
- 细胞的复苏、传代、培养及冻存：
细胞复苏：从液氮保存罐中取出人肝癌HepG2和人正常肝细胞L02细胞冻存管后，迅速放37℃水浴中快速摇动冻存管，直至冻存管中液体完全融化。将细胞悬液移入1.5 ml离心管1000rpm离心5分钟，弃上清，缓慢加入1 ml含有10 %胎牛血清的DMEM培养液或者含有20 %胎牛血清的RPMI-1640培养液混匀，然后将细胞悬液转移到培养瓶中，加4 ml 含10% 胎牛血清的DMEM培养液或者含有20 %胎牛血清的RPMI-1640培养液，置于37℃，5 % CO2培养箱中培养。
细胞传代和培养：
HepG2和L02细胞株复苏后，HepG2用含10 %四季青胎牛血清的DMEM培养液培养，L02用含20 %四季青胎牛血清的RPMI-1640培养液培养，置于细胞培养箱（37℃，体积分数为5 %CO2，相对湿度95 %）培养。当培养瓶中细胞生长融合到90 %以上时，在超净台中弃去培养液，PBS洗涤两遍，加入1 ml胰蛋白酶消化。然后在倒置显微镜下观察发现胞质回缩、细胞间隙增大后，终止消化。弃去液体，加入培养液反复吹打，形成单细胞混悬液，然后将适量单细胞悬液将接种于新的培养瓶中，加入约5 ml培养液继续培养。每2~3天传代1次，取对数生长期细胞进行实验。
