开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题的研究背景、意义和目的
噬菌体裂解酶（Lysin)，又成为噬菌体内溶素，是噬菌体基因编码，在噬菌体侵染宿主后期表达的一种能够特异性裂解细菌细胞壁肽聚糖的蛋白类细胞壁裂解酶。相比噬菌体，利用裂解酶来治疗细菌性感染疾病有更多的优势，噬菌体与裂解酶一样，仅仅攻击细菌而不影响动物细胞，具有较好的特异性，不会影响人体正常菌群，裂解酶可直接作用于细菌细胞壁进行溶菌并不易引起细菌抗性，裂解酶可以通过基因工程菌进行原核和真核表达，能够大量生产。因此，裂解酶作为一种潜在的抗菌剂，优势明显，具有很好的潜力。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus）为革兰氏阳性菌是芽孢杆菌纲葡萄球属的一种代表型细菌。广泛分布于自然界中，其对于生存环境要求不高，需氧或者兼性厌氧，能在高盐的环境中生存。金黄色葡萄球菌可引起多种严重感染，包括：创伤感染、败血症、心包炎、关节炎和乳房炎等。同时葡萄球菌可产生多种肠毒素，引起呕吐和食物中毒。引起奶牛乳房炎的病原细菌主要是金黄色葡萄球菌。该菌可黏附在奶牛乳腺上皮细胞，引起奶牛乳房炎，造成牛奶品质和奶量下降。目前对于葡萄球菌感染以及预防治疗的研究非常广泛。
毕赤酵母是目前运用十分广泛的外源基因表达系统，其培养简单，蛋白产量高，蛋白表达稳定，有翻译后加工修饰功能；鉴于以上优点选用毕赤酵母为金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶的表达载体。
- 课题研究的主要内容
1） 毕赤酵母重组表达载体的构建
根据以转入噬菌体裂解酶基因的重组质粒PPIC9K-JS01采用电脉冲法并探寻合适条件将重组质粒转入毕赤酵母，要求实验成功、获得能成功表达噬菌体裂解酶的毕赤酵母表达载体。
2）毕赤酵母重组单克隆筛选与诱导培养
挑选若干个单克隆进行诱导培养，要求重组载体能够成功的被诱导表达；对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳检测、金葡菌双层点样检测、蛋白浓度检测等，筛选蛋白表达量多活性高的单克隆；并且不断优化实验条件整理最终整理获得一套最佳的诱导蛋白表达的实验条件。
三、 研究难点
1.毕赤酵母重组单克隆筛选及噬菌体裂解酶纯化过程操作复杂，要严格控制实验条件以免对后续表达载体酶活性分析造成影响。
2.能否成功的建立毕赤酵母重组表达载体是本次课题成功的关键，要注意每一步的操作与验证。要成功保证噬菌体裂解酶的目的基因能在毕赤酵母表达体系中发挥作用。
四、进度安排
