研究背景：结肠癌是临床上常见的发生于结肠部位的消化系统恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处。结肠癌是世界第三大恶性肿瘤，在我国结肠癌是近二十年来发病率上升最快的肿瘤之一。结肠癌的治疗原则是以手术切除为主的综合治疗，同时联合化疗、放疗等降低手术后复发率，提高生存率。尽管结肠癌的诊断和治疗方法在不断进步，但结肠癌仍然是全球最致命的癌症之一。由于早期结肠癌临床上无特异性症状，导致大部分患者首次临床诊断时肿瘤已发生浸润性侵袭和远处转移，因此扩大单纯外科手术范围也无法提高病人的生存率。据临床统计，80%以上的病人死于肿瘤的侵袭和转移，因此，找到一种能有效抑制结肠癌细胞的增殖迁移并促进结肠癌细胞凋亡的化合物是非常必要的。
研究预期解决的问题：
- 研究化合物RS137545对体外培养的人结肠癌细胞生长的影响。
- 探讨化合物RS137545抑制结肠癌细胞增殖的作用机制。
研究方法：
- 细胞培养
1.1细胞复苏
从液氮（-196℃）中取出事先准备好的SW480，SW620，HCT116，HT29，CaCo2五种结肠癌细胞37℃水浴中快速解冻；待其全部溶化后，放入离心机中，在1000～1100 r/min 转速下离心 5 min。事先用紫外灯照射超净台 30 min，达到灭菌的效果，然后用移液枪将细胞冻存液吸走，并在冻存管里另加入1mL完全培养基（在培养基中按 10:1 加入胎牛血清和100:1 加入青链霉素），吹打均匀后加入至细胞瓶中，放置在37℃，5% CO2培养箱中贴壁培养。
1.2细胞传代
待细胞数量长至整个细胞瓶的 80%～90%，从细胞培养箱中取出细胞；吸出原培养液，无菌PBS洗涤两次后加入1ml胰酶，倒置显微镜下观察细胞收缩变圆时吸除胰酶，用完全培养基终止消化，吸管轻轻吹打，使细胞从培养皿上脱落，制成单细胞悬液，以1:2~3比率传代，分装入几个培养皿中，补加入培养液轻轻吹打混匀，放入培养箱中培养。
1.3细胞冻存
冻存液配制：20%培养基 70%胎牛血清 10%DMSO，用传代培养的方法将细胞收集到 EP 管中，加入3 mL冻存液，吹打均匀后平分至3个冻存管中。梯度冻存：4℃条件下放置 10～15 min，-20℃条件下放置 20～30 min，-80℃条件下放置 2 d，最后移入液氮罐中长期冻存。
- MTT实验检测抑制率
取对数生长期细胞，常规胰酶消化制成单细胞悬液，调整细胞浓度为1times;105/ml，接种于96孔平底培养板，待培养24h后，后加入处理因素，设立空白对照组（加培养液）、阴性对照（加细胞和培养液）和药物处理组。每组取6个复孔，继续培养到预定时间。然后每孔加入20ul的5g/L的MTT/PBS溶液,再培养4h后小心吸去全部的上清液，每孔加入200ul的DMSO，震荡10min，在酶标仪上570nm处测每孔的吸光度值，按下列公式求出细胞增殖抑制率。实验重复三次。
