咪达唑仑杂质分析
摘要：咪达唑仑用于治疗失眠症，亦可用于外科手术或诊断检查时作诱导睡眠用，属于苯二氮卓类药物，本实验主要对其原料药中的合成产生的物质进行检测，对其进行定量以及对其杂质进行定性。
咪达唑仑：
化学名称：1-甲基-8-氯-6-(2-氟苯基)-4H-咪唑并[l，5-a][l,4]苯并二氮杂䓬
化学分子式：C18H13C1FN3
分子量：325
理化性质：本品为白色至微黄色的结晶或结晶性粉末；无臭；遇光渐变黄。在冰醋酸或乙醇中易溶，在甲醇中溶解，在水中几乎不溶。熔点为160—164°C。
药理学特征：本品具有典型的苯二氮䓬类药理活性，可产生抗焦虑、镇静、催眠、抗惊厥及肌肉松弛作用。肌内注射或静脉注射后，可产生短暂的顺行性记忆缺失，使患者不能回忆起在药物高峰期间所发生的事情。本品作用特点为起效快而持续时间短。服药后可缩短入睡时间(一般自服药到入睡只需20分钟)，延长总睡眠时间，而对快波睡眠（REM)无影响，次晨醒后，患者可感到精力充沛、轻松愉快。无耐药性和戒断症状或反跳。毒性小，安全范围大。
合成路线：
杂质推测：如上图所示，杂质主要为1 2 3 4 5 6 7 8 9，因此在谱图上至少出现九组峰，因其杂质偏多，应采用LC-MS法，
首先可用化学方法将原料药与对照品进行对照来判断药物的纯度
1.
色谱条件：色谱柱 C18
流动相：磷酸盐缓冲溶液（0.1mol/l磷酸溶液-0.03mol/l的三乙胺溶液（1：1）混合，0.1mol/l的氢氧化钠溶液调节PH至3.5）-甲醇（35：65）为流动相
流速：1ml/min 柱温40度，进样体积10ul，检测波长220nm
- 质谱条件
离子源：ESI正离子；离子源电压：ESI 4.5kv 扫描范围：一级质谱m/z 120-400 多级质谱100-400 雾化气：氮气 1.5l/min 干燥气：氮气 10l/min 碰撞气：氩气 脱溶剂管温度：200度 加热模块温度：200度 检测器电压：1.6kv；校准方法；自动调谐优化电压，外标法校准质量数
供试品溶液的配制：取本品适量（5mg），置于10ml的量瓶中，加0.01mol/l的氢氧化钠溶液1ml，避光放置1h，用流动相稀释至刻度，避光3h，即得
3.
稳定性实验
- 酸破坏供品实验：
取用本品适量（5mg），置于10ml量瓶中，加入2mol/l的盐酸溶液2ml，放置24h后加入2mol/l的氢氧化钠溶液2ml中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得
- 碱破坏供品实验：
取用本品适量（5mg），置于10ml量瓶中，加入2mol/l的氢氧化钠溶液2ml，放置24h后加入2mol/l的盐酸溶液2ml中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得
- 氧化破化供品实验：
取用本品适量（5mg），置于10ml量瓶中，加1.5%双氧水2ml，放置0.5h，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得
- 高温破坏：
取用本品适量（5mg），105度12h放冷后放入10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得
- 光破坏：
取用本品适量（5mg），置于4500lx光照24h后放入10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得
HPLC法测定：去标准品咪达唑仑加甲醇溶液制备成10ug/ml的标准品溶液，定为溶液1，供试品同法制备成溶液2，各取10ul采用注入高效液相色谱中，采用外标法，寻找目标峰
所出结果供试品溶液的谱图应为多重峰，但是由于供试品杂质峰较多，且含量较低，应对其进行富集化处理，处理方法如下，对供试品进行反复进样，并使用自动流分收集仪，将流分收集到96孔板中以富集杂质。之后，按照各杂质的保留时间，将96孔板的流分进行合并，氮气吹干后，用流动相复溶，并采用LC-MS，以测定其杂质结构
根据药典测定方法：记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍（0.2 %)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%)。供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰忽略不计，因此对于大于对照溶液主峰面积0.2倍的杂质为主要杂质，小于0.05倍不予考虑。
由于其成分性质的不同，可采用梯度洗脱的方式进行洗脱，调整A相和B相的比例进行梯度洗脱，洗脱方法如下
| 时间/min |
流动相A（% 磷酸） |
流动相B（甲醇%） |
| 0 |
97 |
3 |
| 20 |
80 |
20 |
| 40 |
70 |
30 |
| 41 |
40 |
60 |
| 50 |
40 |
60 |
| 60 |
30 |
70 |
极性推测：1gt;2gt;3gt;4gt;5gt;6gt;7gt;8gt;10gt;9
质谱图分析推测：
1.由于苯二氮卓类结构中具有1,2位的酰胺键和4,5位的亚胺键，遇酸或碱在加热条件下易水解开环。可以发生1,2位开环，也可以发生4,5位开环，两过程可同时进行，产物是邻氨基二苯酮及相应的alpha;-氨基酸类化合物。这一水解过程也是苯二氮卓类药物共同的反应。水解开环反应是早期苯二氮卓类药物不稳定和作用时间短的原因。可用加酸加碱来对质谱峰进行排除
因此根据文献上的图示可知，可从质谱上排除啊相应的咪达唑仑的峰，然后从峰响应较大的图上找到相应的峰来推测相应的杂质，对于响应最大的物质最后可取用相应的标准品用HPLC取进行确证
对于质谱主要采取三种样品处理法，具体见样品处理第二个，2.1-2.4，进入质谱，根据不同样品的结果来分析供试品的杂质。
注意事项；本品必须保存着黑暗环境，因苯二氮卓类遇光易分解，因此溶液因保存于棕色试剂瓶内，且实验步骤的实验也应在避光环境下完成，避免新杂质的产生，影响鉴定。
定量分析：
化学滴定法：取本品约0.12g，精密称定，加冰醋酸 30ml溶解后，加醋酐20ml，照电位滴定法（附录Ⅶ A ) ，用高氯酸滴定液（0.lmol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml高氯酸滴定液（0.lmol /L ) 相当于16.29mg的C18H13C1FN3。
色谱分析：C供试品=A供试品/A标准*C标准（ug/ml）
百分含量：w=CV/m0*100%
C：供试品溶液的浓度
V供试品溶液的溶解体积
M0：供试品的重量
