1.前言
建立成功可靠的氧化应激模型，对于筛选抗氧化活性物质及阐明其作用机制非常重要。本实验以HepG2细胞为研究对象，利用不同浓度H2O2诱导不同时间，通过检测细胞内ROS水平和MDA含量，以及SOD、CAT和GSH-Px活性等指标，来摸索过氧化氢的最佳作用浓度，建立体外氧化应激细胞模型，为揭示氧化应激机制以及研究和筛选抗氧化药物和功能食品奠定了实验基础。
2.拟研究的问题
氧化应激（oxidative stress, OS）指机体内活性氧（reactive oxygen species，ROS）产生过多，导致氧化和抗氧化系统失衡，引起细胞或组织氧化损伤的一种病理状态[1]。本实验以人肝癌细胞(HepG2)为基础，以过氧化氢为氧化应激诱导剂构建体外氧化应激细胞模型。
3. 研究手段
1)HepG2细胞的培养
将HepG2细胞置于37 ℃、5 % CO2的培养箱中培养。每2d更换1次培养基，3d后传代，细胞经胰酶消化，以1:3的比例进行传代培养，取对数生长期细胞进行实验。
2) H2O2损伤细胞条件的筛选
取对数生长期HepG2细胞，加入含不同浓度H2O2的培养液，使终浓度分别为50、100、200、400、800mu;mol/L，以未加 H2O2为对照。损伤时间分别为 2、4、6、8、10、12、14 h，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，采用二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）法检测活性氧水平。
3)细胞存活率检测 采用噻唑蓝（MTT）法，570 nm波长下酶标仪测定各孔吸光值。
剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付
