荧光偏振免疫分析法测定抗体浓度及在细胞株构建中的应用文献综述

 2023-02-08 20:46:37

以抗体为基础的治疗药物开发过程可能有很大不同,但要将抗体治疗药物推向市场,依赖于找到可以稳定产生大量单克隆抗体的细胞克隆。

IgG 产物检测在开发和生产单克隆抗体的多个阶段都是非常重要的一步。

通常 IgG 定量的方法都需要专门的仪器和技术人员,例如 HPLC(高效液相色谱)、表面干涉测量和 ELISA 检测(酶联免疫吸附实验)。

HPLC 法被认为是抗体浓度检测的金标准,但是 HPLC 测样通量低、对仪器和操作人员专业技术要求较高; ELISA 是蛋白定量的成熟方法,但实验过程冗长、步骤多,且通常需要多倍稀释样品使其在标准曲线范围内;表面干涉法通量较高,但费用昂贵。

这些用于测量溶液中 IgG 的通用方法(ELISA、HPLC 和表面干涉法)多依赖于分析物与吸附或共价连接到固相的特定 IgG 结合蛋白(通常是重组葡萄球菌蛋白 A)的结合。

而荧光偏振免疫分析法可以实现直接在微孔溶液相与抗体结合测定抗体浓度,省去了表面结合、洗涤、洗脱步骤,从而实现更简便更快速的抗体浓度分析方法。

荧光偏振理论在 1926 年被 Perrin 首先描述,溶液中的荧光分子在受到偏振光照射时,可吸收并释放出相应的偏振荧光。

如果在激发时荧光物质处于静止状态,发射光将保持原有激发光的偏振性,如果其处于运动状态,发射光偏振平面将不同于原有激发光的偏振特性。

通过设计免疫亲和结合分子,将荧光偏振理论应用于分析目的蛋白,即为荧光偏振免疫分析法(FPIA)。

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