课题背景：
血栓是由血栓形成和血栓栓塞两种病理过程所引起的血栓栓塞性疾病。血栓的形成是一个复杂的过程，由多种因素参与引起。它与血流、血管壁、血小板、凝血与纤溶活性等因素相关。[1]一定条件下这些因素相互作用，在血管内或心脏内膜局部凝结成栓的过程即为血栓的形成过程。血栓从形成部位脱落，在随血液流动过程中，部分或全部堵塞血管，引起血管或器官缺血、缺氧、淤血、水肿继而坏死等病理过程即为血栓栓塞。[2]如今，血栓栓塞已经成为全球范围内，死亡发生的主要因素之一。血栓栓塞可分为动脉栓塞和静脉栓塞。缺血性心脏病和缺血性脑卒中主要由动脉栓塞和深静脉栓塞引起，而静脉栓塞会引起肺栓塞。[3]
血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）是贴于血管腔表面的鳞状细胞，形状扁平，呈单层纵向排列。血管内皮细胞拥有多种生物学功能，如构成生物屏障，调节血管内外物质交换等。它还拥有分泌拥有抗血栓功能的物质的职能，即分泌乙酰肝素以及纤维蛋白溶酶原激活剂等，并可作为血管剪切力感受器, 对细胞损伤作出反应。[4]
VEC有一种特殊的分泌细胞器，称为韦伯潘力氏小体（Weibel-Palade bodies ，WPBs）。WPBs可以分泌一系列与炎症、血管生成、组织修复有关的蛋白和血管性血友病因子（Willebrand factor ，VWF），也称因子Ⅷ 相关抗原，参与血液凝固和血栓形成。VWF是WPBs的标志性也是最主要的成分，平常以管状形态储存于WPBs中，而释放时则变成长串形以捕捉循环中的血小板来促进凝血进程的发展。[5]
动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是冠心病和缺血性脑卒中的主要病因之一。由于动脉内血流速快，血压高，所以动脉内的凝血过程机制主要是AS斑块破裂导致急性血栓形成[6]。在动脉粥样硬化斑块破裂时，血小板与暴露的胶原及VWF因子黏附，血小板在局部聚集形成白色血栓，同时，凝血因子被组织因子激活而诱发凝血瀑布反应，进而形成血栓。
VWF与动脉粥样硬化等心血管疾病相关。有研究表明，VWF水平的升高会导致缺血性心血管事件风险的增加[7]，如冠心病、缺血性脑卒中和心肌梗死。证据之一就是血管性血友病的患者有VWF缺陷，并且他们患心血管疾病的风险低于常人。
综上所述，动脉血栓可导致缺血性脑卒中与心脏病等心血管疾病，动脉血栓的发生与动脉粥样硬化相关，VWF的水平又与心血管疾病发生的风险正相关。而氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是由低密度脂蛋白（LDL）在体内氧化修饰形成的，是AS的发生、发展中的关键因子。因此可以推测,诱导动脉粥样硬化的LDL可能会增加VEC释放VWF。通过摸索ox-LDL刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放VWF的最佳时间和剂量，可能可以为动脉血栓的发生机制研究提供新的细胞模型。
实验设计流程：
1、HUVEC培养：
（1）细胞复苏：
