x一、 选题意义意义:许多海洋生物中的活性多糖由于具有增强免疫功能,抗辐射,抑制肿瘤生长,抗炎,降血糖等广泛的生物学活性而受到人们的普遍关注。
海胆是一种低等的海洋无脊椎动物,属于棘皮动物门(Echinodermata)海胆纲(Echinoidea)。
雌海胆的生殖腺为名贵的海产珍品,被称为云丹,含有丰富的蛋白质、多糖、脂肪酸、维生素及各种微量元素等对人体有益的营养成分,因而海胆不但具有较高的食用价值,同时还有极好的药用价值,尤其对增强免疫力、防治心血管疾病有较好的效果。
海胆黄多糖(SEP)系从光棘球海胆的海胆黄中分离纯化得到的均一多糖组分,国内外关于海胆活性成分的研究已经取得了一些进展,而有关海胆多糖黄多糖的含量测定和分子量测定研究尚未见报道二、 论文综述【摘要】目的:测定海胆黄多糖的分子量和含量【关键词】海胆黄多糖 凝胶过滤法液相色谱法 分子量测定含量测定一.多糖的分子量测定多糖的分子量测定常用的是凝胶滤过法:将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱,用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡,然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱,同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱,分步收集,苯酚-硫酸法监测,分别求得洗脱体积Ve,然后再将兰葡聚糖(MVgt;200万)上同一条柱,求出柱的空体积Vo,根据Ve/Vo与logM之间存在着线性关系,可绘制标准曲线。
最后,将待测样品按上述不变的条件上柱,求得待测多糖的Ve。
通过标准曲线上的Ve/Vo,查得待测多糖的分子量对数,便可求出M。
二.多糖的含量测定多糖的含量测定方法根据原理不同,主要可分为以下两类:1.多糖水解而建立的方法,包括比色法、间接碘量法等,它们通过发生化学反应测定结果,实验中影响因素较多,干扰大;2.直接测定多糖而建立的方法,主要是凝胶渗透色谱,但由于该方法通常缺乏多糖标准品而缺乏可信度。
(1)比色法:主要是苯酚-硫酸法[11]和蒽酮-硫酸法[12],它们都是用硫酸水解多糖,形成的单糖分子脱水生成糖醛衍生物,与显色剂显色后在一定波长和浓度范围内有最大吸收,其吸光度值与糖浓度呈线性关系。
这两种方法通常以无水葡萄糖为对照品,采用紫外分光光度法测定吸光度从而计算含量。
苯酚-硫酸法灵敏度较高、受蛋白质等物质干扰较小,应用最为普遍。
