凝胶微球中微生物活性的荧光检测方法文献综述

 2022-12-24 13:49:03

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、课题背景

微球是指药物分散或被吸收在高分子、聚合物的基质中形成的微粒分散体。微凝胶是微尺度尺寸在10-1000 mu;m范围内的水凝胶颗粒。

通过之前已有荧光的活细胞死亡测定法测定的实验结果表明,包封在微凝胶颗粒中的细胞的生存力至少为94%。微囊化的细胞可以在微凝胶中培养,完全保持其活力。所以,微凝胶颗粒可用于临时细胞包封,允许在包封期间研究和操纵细胞,然后通过微凝胶支架的分解按需分离和收获细胞。

[1]通过使用氟化油,能过保证包封细胞的高生存能力。在乳化过程中,形成连续相的非极性液体以及表面活性剂是高度生物相容的。此外,在微凝胶向水相的转移,需要尽可能温和地进行,离心或移液产生的高剪切力,以及用于破坏乳液的不与细胞相容的化学物质,会损害被包封的细胞。将微凝胶悬浮在油中的时间能过允许它们温和地转移到水相,而不需要移液和离心。

[1]聚乙二醇(PEG)是一种市售的合成聚醚主链聚合物,通过环氧乙烷的可控阴离子开环聚合制备通过选择合适的引发剂,单官能的,同和异双官能线性聚乙二醇,以及多臂聚乙二醇和聚乙二醇树状大分子可以合成。通过使用线性聚乙二醇-丙烯酸酯并应用自由基交联或通过将官能化线性聚乙二醇与互补多臂聚乙二醇混合,这些官能团可用于形成聚合物水凝胶和微凝胶。

聚乙二醇水凝胶通常被认为透明质酸由右旋葡萄糖醛酸和右旋乙酰氨基葡萄糖的交替单元组成。它是人体的正常组成部分,参与细胞标记和矩阵组织。

透明质酸(HA)有着优良的生物相容性,它是组织工程和再生医学中常用的生物聚合物。液滴的微流体技术能够产生微微升大小的液滴,这些液滴可以作为微型容器,用于短期培养和直接分析小细胞数量,直至单个细胞。

通过向这些容器中添加和交联模拟合成或天然聚合物的电化学物质,微凝胶的制造成为可能。包裹在微凝胶中的细胞可以培养数天,微环境的生化和生物物理特性可以被调整以模拟生理环境。水凝胶和基于微滴的微流体的结合为微凝胶的制造开辟了基础和应用生物学研究的新可能性。

荧光素二乙酸脂(FDA)是一种无色非极性化合物。通过被动扩散渗透进细胞膜内。在细胞内,通过被代谢的活性微生物而产生的非特异性酯酶切割,产生绿色荧光化合物—荧光素。之后通过测量其荧光或者吸光度来进行光谱检测。FDA分析依赖于活细菌的存在下,产生的荧光素与死的代谢物产生的背景之间,通过检测其荧光和吸光度,可以检测出差异。

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