开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一．拟研究的问题长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）是在真核生物中新发现的一类长度大于200个核苷酸，没有长阅读框架，但往往具有mRNA结构特征（帽式结构和polyA尾巴）RNA 。
LncRNAs表达水平比较低，受到转录和转录后调控机制的严密调控。
它们都不编码蛋白质，被发现参与调节多种重要的细胞活动，如基因表达，招募染色质修饰物，调节X染色体失活（XIST），基因组印记（H19），蛋白质折叠和蛋白质活性等。
人食管鳞状细胞癌（ESCC）的发生发展都伴随着一系列的遗传变异，究者们普遍认为，食管鳞癌的发生发展可以归因于遗传易感性、环境因素以及基因与环境因子的相互作用。
近日，一些全基因组关联研究（Genome-wide association studies，GWAS）已经探索了食管鳞癌相关的遗传变异，并且确定了食管鳞癌易感基因位点。
本课题本研究通过整理总结以 GWAS 为基础的报道所确定的食管鳞癌的易感区段，以及通过生物信息学分析已报道的 LncRNA 数据库和网络资源 UCSC、Ensembl 和 RefSeq 数据库，选出候选LncRNA，通过实验论证候选LncRNA与ESCC的相关性和鳞癌细胞具体发生发展途径。
二．实验目的本实验主要筛选出与人食管鳞癌细胞（ESCC）发生相关的LncRNAs，并论证其发生的相关性和鳞癌细胞具体发生发展途径。
三．材料和仪器：1. 样品和标准品Eco-109 南京军区医院取样2. 材料和试剂DNA 提取试剂盒 天根生化科技（北京）有限公司TRIzol 美国英杰生命技术有限公司(Invitrogen)蛋白提取试剂盒 天根生化科技（北京）有限公司DNA 片段纯化试剂盒 天根生化科技（北京）有限公司质粒提取试剂盒 天根生化科技（北京）有限公司引物 生工生物工程(上海)股份有限公司 3. 实验仪器〖CO〗_2恒温培养箱 美国Thermo 公司实时荧光定量 PCR 仪 西安天隆科技有限公司超净台 苏州净化设备有限公司小型离心机 上海安亭科学仪器制造厂倒置显微镜 上海测维光电技术有限公司全自动高压蒸汽灭菌锅 上海申安医疗器械有限公司移液枪 大龙高效液相 北京创新通恒PCR 仪 My geneTM Series Peltier Thermal cycler数显恒温水浴锅 国华电器有限公司超纯水制造仪 成都超纯科技有限公司PH计 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司四．实验方法1、LncRNAs的选择我们首先搜索了 PubMed 数据库中至2015年的食管鳞癌相关的GWAS报道，搜索采用的关键字是全基因组关联研究、GWAS、食管鳞状细胞癌、食管鳞癌、ESCC和食管，并且搜索到的相关报道的参考文献也是我们再次检查搜索的对象。
通过UCSC、Ensembl和Refseq 在线数据库的分析，将与蛋白编码基因的任一部位有重叠的LncRNAs排除，只挑选位于基因间 LncRNAs。
