人源QM蛋白截短体在大肠杆菌中的表达及纯化文献综述

 2022-12-09 14:59:10

开题报告内容:

  1. 拟研究或解决的问题

研究发现,QM基因序列存在于大多数真核生物中,长745bp,编码一个分子量为24.5kDa的碱性蛋白,包含7个外显子,定位于Xq28区域。QM 蛋白是一种多功能蛋白,在肿瘤抑制、核糖体构型与功能维持、转录调控、免疫应答及细胞生长分化和凋亡等方面都具有重要作用。为研究QM蛋白N端结构域的功能,本实验尝试通过表达纯化 QM蛋白的N端截短体,继而进行体外研究。

  1. 采用的研究手段

本课题利用原核表达系统,以大肠杆菌作为宿主,诱导表达截短的人源QM蛋白。首先,利用从细胞中提取的人核糖体蛋白L10的mRNA,反转录为cDNA,通过PCR将QM截短体基因扩增。其次,构建目的基因的克隆载体和表达载体,将构建好的重组基因导入大肠杆菌,培养诱导表达人核糖体蛋白L10。最后,利用亲和层析柱纯化蛋白。

  1. 文献综述

QM蛋白的研究进展

摘要:人核糖体结合蛋白L10(QM)基因定位于Xq28区域,并且在进化上高度保守。在已有的研究中证明,QM具有多种生物学功能,参与肿瘤抑制作用、编码核糖体蛋白、参与转录调控、免疫应答以及细胞的生长、分化及凋亡,并证明其为肿瘤抑制因子。本文主要介绍QM蛋白的功能,为深入研究QM蛋白提供参考。

关键词:QM蛋白;生物学功能;肿瘤抑制

1.QM蛋白的简介

我们普遍认为QM蛋白是一种肿瘤抑制蛋白,它是由Dowdy等[1]对Wilmsrsquo;肿瘤发生细胞系和来自同一细胞系经转化后非肿瘤发生的杂合细胞进行cDNA/RNA差减杂交实验克隆的一个cDNA片段翻译合成的,QM基因长745bp,编码一个分子量为25kDa的碱性蛋白,包含7个外显子,定位于Xq28区域。在植物、动物以及真菌等真核生物中,我们也陆续发现了QM的同源基因,并且其氨基酸高度保守[2]。序列分析显示其N端的175个氨基酸高度保守,特别是带电氨基酸,相反,它们在C末端的变异相对比较大。进化分析也表明,QM基因大约每2200万年才有1%的变化[3]。QM蛋白几乎在所有的哺乳类动物组织中都有所表达,但不同的生长和分化阶段其表达水平不同[4]。而且,切掉酵母菌的QM基因对其是致命的[5]。这些研究表明QM蛋白可能对细胞的生长和分化有很重要的作用。

  1. QM蛋白的结构及分布

QM转录及表达在整个发育及分化过程中是变化的,QM mRNA在不同组织中以不同水平表达,QM相关肿瘤的不同时期,表达水平也不相同。QM的结构如下图所示,其核心段为34-182位氨基酸残基。

图1. QM蛋白的3D结构

剩余内容已隐藏,您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容!立即支付

发小红书推广免费获取该资料资格。点击链接进入获取推广文案即可: Ai一键组稿 | 降AI率 | 降重复率 | 论文一键排版