1、研究背景（文献综述）
关于中性粒细胞的最早报道可以追溯到1879年到1880年，当时Paul Ehrlich使用一套煤焦油染料来询问颗粒与白细胞的不同染色特性。酸性和碱性染料分别显示嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，中性染料显示嗜中性粒细胞。中性粒细胞的细胞核为分支树叶状，因而又称之为多形核白细胞。血液中性粒细胞一半随血液循环，其余滚动在小血管的内皮细胞上，两部分相互交换，保持动态平衡。此外，骨髓中也储存有15~20倍于外周血的中性粒细胞。中性粒细胞也是血液中重要的吞噬细胞，具有强大的变形游走和吞噬能力。中性粒细胞是具有特殊生物特性的免疫细胞，具有强大的抗菌特性。在细菌入侵时，中性粒细胞在趋化因子的作用下可以最快抵达感染部位，在吞噬细菌的同时，可以释放更多物质以吸引更多数量的中性粒细胞。这些细胞吞噬并随后非常有效地杀死原核生物和真核生物。重要的是，中性粒细胞之所以具有抗菌功能，并不仅仅是因为它们能够在细胞内有限的空间内攻击微生物。它们可以将效应器释放到细胞外空间，在那里，即使是死后，它们的杀伤机制也能持续并保持功能。中性粒细胞的抗菌活性不应被误解为微生物特异性，而应被视为更一般的生物毒性。除了对抗感染，中性粒细胞还具有异质性以及抗原呈递的作用。
中性粒细胞是白细胞中最丰富的一种，是抵御病原体侵袭的第一道防线。然而，粒细胞的可塑性和多样性已经日益被揭示，特别是在协调适应性免疫反应方面的多功能功能。最近大量的证据表明，粒细胞在病理或炎症条件下可以获得抗原提呈细胞的功能。此外，当与选定的细胞因子共同培养时，可获得MHC II类和共刺激分子的表面表达以及T细胞的刺激行为。因此，将粒细胞视为终末分化的短寿命吞噬细胞的经典观点正在转变为表型和功能异质性的细胞，这些细胞与其他白细胞群体相互作用，并在先天免疫和适应性免疫之间提供额外的联系。中性粒细胞作为先天免疫系统的关键组成部分，通常被认为是对病原体的第一道防线的快速反应。长期以来，中性粒细胞的作用一直被认为仅限于防御的初始阶段。然而，大量证据表明，中性粒细胞存在着功能异质性和可塑性，其中最强调的是它们在形成适应性免疫反应方面的多用途能力。T细胞反应的协调粒细胞通过抗原呈递已被描述和受到相当多的关注。随着对中性粒细胞认识的逐渐深入，有研究表明中性粒细胞也可能具有抗原提呈功能。
2、研究目的
中性粒细胞作为人外周血中比例最高的白细胞，在炎症反应应答过程中发挥着重要调控作用。早期研究普遍认为，中性粒细胞的生命周期较短，其主要功能在于抵御细菌等病原体的感染。近年来的研究发现，中性粒细胞具有多种不同生物学功能且存在着较高的表型和功能异质性，其广泛参与肿瘤发生发展、疫苗免疫应答、自身免疫性疾病等多种生物学过程中。目前科学界对于中性粒细胞在生理以及肿瘤病理状态下异质性的研究已经取得较大进展，但对于不同组织中的中性粒细胞的功能、表型的特异性的相关机制解释较少。本研究中，我们将以小鼠为模型，探索不同组织部位中性粒细胞的异质性，并进一步研究疫苗注射后，中性粒细胞对于疫苗特异性免疫应答产生过程的影响。
3、研究方法
（1）小鼠外周血中性粒细胞的分离及提取方法建立及优化（使用solarbio公司的试剂盒）
操作步骤： 1. 取新鲜抗凝全血，血液体积小于5mL时，在离心管中先加入4mL试剂A，后将2mL试剂C小心叠加于试剂A之上，形成梯度界面，将血液平铺到分离液液面上方， 注意保持两液面界面清晰。2. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超过1200g）。 3. 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层。4. 用吸管小心吸取试剂C与试剂A之间以及试剂A中的中性粒细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液）。 5. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心 10min。 6. 重复步骤6 7. 弃上清，细胞重悬备用。
（2）不同佐剂刺激条件下，中性粒细胞的活化应答情况
