一.课题研究的背景及研究现状
1.研究背景
1.1 A2004为白色结晶粉末，无臭，溶于水和甲醇，略溶于乙醇，微溶于三氯甲烷，而在环己烷和乙醚中几乎不溶。其熔点高。作为药物，A2004发挥药效的机制主要是由于它是beta;肾上腺素受体阻滞剂[1]。临床上用于治疗高血压，心绞痛及青光眼，特别是对原发性开角型青光眼疗效优于传统的降压眼药，且起效快，副作用小，耐受性好。因此在临床使用较多，研究较为广泛的是其制剂-滴眼液。
1.2 药物的残留溶剂指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能安全去除的有机溶剂。药品残留溶剂的存在是一种潜在性的危险，可能会使药物产生毒性或使药物的毒性增加从而使药品的安全性降低。因此，对药品残留溶剂检测方法的探索和优化是保障药品质量，提高药品安全性的具有重要研究意义的工作。人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）的残留溶剂指导原则中将药品残留溶剂分为以下四类：第一类为因避免使用的溶剂，指为人体致癌物、疑似的人体致癌物或能对环境造成公害者；第二类为应限制使用的溶剂，指为能导致动物非遗传毒性致癌或可能导致其他不可逆毒性反应的试剂；第三类为低毒性溶剂，为在药物中以一般量存在时对人体无害的溶剂，在无需论证的情况下，该类溶剂的残留量不高于0.5%是可以接受的；第四类为没有足够毒性资料的溶剂，这类溶剂在赋形剂、原料和制剂的生产中也许会被采用，由于尚无足够的毒理学依据，生产厂在使用时应提供这些溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报告。《中国药典》对于残留溶剂的分类遵循上述ICH指导原则，也是将其分为四类[2]。
1.3 通过化学合成法制备A2004时，主要有以下三种方法可引入有机溶剂：一.作为合成原料或反应溶剂而引入，二.作为反应的副产物而引入，三.通过其他途径而引入。在上述三种方法中，着重考虑作为原料或反应溶剂而引入的有机溶剂。现工业生产全合成A2004较为成熟的方法需合成多个中间体，在合成下述中间体的过程中相继引入了不同的有机溶剂：氨基乙腈硫酸氢盐中间体的合成过程中引入了乙醇、3,4-二氯1,2,5-噻二唑中间体的合成引入了乙醚、1,2,5,6-O-异亚丙基-D-甘露醇中间体的合成引入了丙酮和环己烷、S-(-)-3-叔丁胺基-1,2-丙二醇中间体的合成引入了甲醇和三氯甲烷、S-(-)-2-苯基-3-叔丁基-5-羟甲基恶唑烷中间体的合成引入了甲苯、s-(-)-噻吗洛尔中间体的合成引入了叔丁醇[3]。综上所述，再结合中国药典需检测的常见残留溶剂的种类，A2004需检测的有机残留溶剂可初步考虑为乙醇、乙醚、丙酮、环己烷、甲醇、三氯甲烷、甲苯和叔丁醇。
2.研究现状
2.1 目前，国内外关于A2004残留溶剂的测定方法确切的相关研究很少，而关于残留溶剂的研究较为成熟。在国内现有的研究资料中残留溶剂的测定最早使用的是热重测定法、干燥失重法，这些方法可得到全部残留溶剂的总量但无法对某一特定溶剂进行检测，即方法不具有专属性且易受外界水分因素的影响。其次是核磁共振氢谱法。再者是红外、紫外光谱法，其中使用较多的是紫外分光光度法（在生物制品中一般都是运用此法进行三氯甲烷残留量的测定），但此法灵敏度较低。最后是气相色谱法，其分离能力和灵敏度都相对较高，故此法是药物残留溶剂测定最常用的方法[4-5]。
2.2 2015版《中国药典》四部的通则中详细地阐明了残留溶剂的测定方法，采用的是气相色谱法，分为以下三法：第一法（毛细管柱顶空进样等温法），当需要检查有机溶剂的数量不多且极性差异较小时，可用此法；第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法），当需要检查的有机溶剂数量较多且极性差异较大时，可采用此法；第三法（溶液直接进样法），此法可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。测定时样品的前处理方法和测定时的色谱条件通则里也有详细阐述[1]。从A2004的制备工艺中可初步得知，其需测定的残留溶剂种类多且极性差异较大，因此首要考虑用第二法即毛细管柱顶空进样程序升温法对其残留溶剂进行测定。
2.3 同时，在2015版《中国药典》二部的各论中也对各种药物需要测定的残留溶剂的种类以及具体测定方法作了规定，但A2004项下并没有残留溶剂测定的种类及相关要求。而在通则（0861）中，残留溶剂测定法下所做的规定可对药品的残留溶剂进行全面的筛查。采用极性和非极性这两种极性相反的色谱柱，实现对52种适合顶空分析的残留溶剂的互补分离，并以相对调整保留时间作为残留溶剂定性的指标，初步确定样品中所含残留溶剂的种类[6]。同时应考虑A2004在生产过程中引入或残留的有机溶剂，均应按上述通则中提到的“残留溶剂测定法”检查。有了初筛结果后，再结合已经分析得到的A2004制备过程所引入的有机溶剂，选择合适的色谱柱系统，用相应的对照品来验证初筛结果及初步的分析结果，考察样品溶液中残留溶剂的保留时间是否与初步判断的对照品的保留时间一致。如果色谱图中出现未知峰时，则还是参照通则0861中的残留溶剂测定方法，通过两次预实验初步判断出可能的残留溶剂，然后再用标准样品进行验证。经过上述实验的反复验证，从而确定A2004待测样品中可能存在的所有残留溶剂。
2.3 国外药典对所有残留溶剂的测定与《中国药典》基本相同。USP 27版中对残留溶剂的的检测大多采用气相色谱法，其中除第4法及对包衣片中二氯甲烷测定法采用顶空进样外，其他各法均采用直接进样的方法，除气相色谱法外，还有个别品种采用液相色谱法。BP和EP中对残留溶剂的检测采用气相色谱法，除常用的系统A及系统B外，还对环氧乙烷和二氧六环单独规定了一个系统，三种系统全部采用顶空进样程序升温法。JP中对残留溶剂的检测也采用气相色谱法，进样方法也是采用顶空进样[7]。综上，能更一步确定A2004残留溶剂的测定采用毛细管柱顶空进样系统程序升温法。
