一、背景及意义
丙氨酸氨基转移酶在维持生物正常的葡萄糖和氨基酸代谢中起着重要作用，更与人体肝病，糖尿病，冠心病等疾病密切相关，在临床应用上有着重要指示作用。目前国内对于ALT，特别是ALT1的相关研究主要是侧重于临床生化检测，包括检测方法的优化和比较等，有关蛋白的研究较少，关于丙氨酸氨基转移酶的研究有待进一步深化。
研究丙氨酸氨基转移酶的制备及质量标准，对于补充目前国内的研究有着重要意义，对临床上相关的需要起到一定的补充作用，也能为通过ALT来研究治疗肝脏相关疾病提供新的思路与方法。
二、拟研究或解决的问题
- 探寻更优的丙氨酸氨基转移酶制备方法。
- 选定的实验方法是否具有可行性，当前实验室条件下能否顺利进行并完成。
- 实验进行中可能出现的问题及解决方法。
- 对标质量标准中的方式方法，本实验所采取的测定方法及测定标准是否有效，是否有临床或其他价值。
- 当前研究完成预估结果和假定最终结果有偏差情况下的处理方式。
三、采用的研究方法和手段
- 文献综合研究法：通过搜集整理文献资料，进一步正确了解掌握所要研究的问题，并且借助前人的研究完善研究的方法，规避失误的可能。
- 实验研究法：是通过主支变革，控制研究对象来确认事物间的因果联系的方法。经过搜集整理文献后，制定出合适的实验方法，人为操纵实验条件，改变对象等来进行试验。
- 定量分析法：通过对实验结果的数据进行定量分析，进一步精确化所研究对象，以便更加科学地揭示规律，把握本质，理清关系，预测发展趋势。
- 统计分析法：运用数据分析软件，采用人工和计算机统计相结合的方法，筛选出所有合乎要求的信息，在定量研究的基础上进行定性分析。
四、文献综述
制备丙氨酸氨基转移酶，首先要了解它的理化性质，来源存在，进一步确定制备方法，筛选出合适的方法，然后再进行检测分析，之后思考质量标准的确定及其影响因素等。
已知人体丙氨酸转移酶有三种同工酶，即ALT1、ALT2、ALT2-2，前两者在蛋白质水平上有69%的一致性和78%的相似性，且都具有转氨酶活性[1]。对于ALT1和ALT2蛋白，在LIU等人的实验中发现，两种酶均在-80℃时的酶活性稳定性良好，两种蛋白在25%甘油的缓冲液中、pH值在6.8~8.0之间保持原有酶活，另外发现磷酸吡哆醛能够令丙氨酸氨基转移酶的活性升高，保护酶蛋白，对其有稳定作用[2]。ALT作为临床上一项常用的有关肝脏功能的指标，能够反映肝细胞的损伤。但是由于ALT不仅存在于肝脏中，还存在于身体其他多个组织器官中，所以说检测ALT本身所得到的结果并不具有特异性。但是当含有转氨酶的组织细胞发生病变时，导致的血液中转氨酶活性升高，可用做判断某一器官疾病的参考指标[3]。丙氨酸氨基转移酶的影响因素有很多，一是生理方面的性别因素、年龄因素、遗传因素，二是生活方面的饮食因素、饮酒因素、吸烟因素、运动因素、职业因素以及其他因素[4]，包括体外检测环境的不同都会对检测结果造成影响[5]，所以标本采集的时候要确保不偏颇，做到全面、平均、准确。通常ALT在血液和血清中的正常水平分别为5～40和7～56U/L[6]，而且，通过实验发现，温度对酶反应有着绝对重要的影响,根据IFCC建立的ALT在37℃参考方法要符合精密度和准确度的要求，线性范围的检测上限为330.4U/L[7]，可以作为一个参考。
ALT的检测方法有酮体粉法、赖氏法、丙酮酸氧化酶法和速率法（也称连续检测法或动力法）检测时可以直接目测或使用分光光度计、酶标仪、生化分析仪[8-12]。酮体粉法因误差大等原因目前已经淘汰[13]，丙酮酸氧化法对实验的反应时间要求严格，赖氏法、速率法易有误差但总体较好。血清ALT1检测方法可以通过双抗体夹心法检测血清ALT1，运用胶体金的制备-柠檬酸三钠还原法进行检测[1]。
酶的制备方法简单来说就是运用提取分离法，采用各种提取、分离、纯化技术来从生物体中获得酶，在制备过程中还要注意保证酶的活性不受损害，失去酶活也就失去了酶的作用。为了提高酶的稳定性，还可以进行酶分子修饰或者说酶分子改造，通过蛋白质工程技术，进一步获得更优良活性更稳定的酶。王鹏等使用分子克隆技术构建表达载体，转化入宿主菌经诱导分析表达后得到ALT1蛋白，该实验采用的宿主菌是感受态的DH5alpha;大肠杆菌，截短表达ALT1[14]，实验总体较为成功。林深等从数据库中获得大豆谷丙转氨酶的可能序列，并用软件进行同源建模，得到三维结构模型来进行进一步的实验和验证[15]，都可以作为一个参考。
