开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
1.引言：
变态反应疾病被世界卫生组织 (WHO)认为是当前世界性的重大卫生学问题 , 世界各国变态反应性疾病的总发病率约为 5% ～ 20%, 此类疾病包括过敏性哮喘 、过敏性鼻炎 、过敏性皮炎等 ,是临床常见病、多发病。机体对某些抗原初次应答后，再次接触相同抗原时机体对该抗原免疫应答增强，诱发一系列炎症反应从而导致相应临床症状。根据反应发生的速度、发病机制和临床特征将超敏反应分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型。而Ⅰ型超敏反应发生速度最快，一般在第二次接触抗原后数分钟内发生反应，IgE抗体是介导Ⅰ型超敏反应的抗体.当过敏原经黏膜表面或皮肤进入机体后, 可活化浆细胞产生特异性 IgE(specific IgE, sIgE), 后者与嗜碱性粒细胞及肥大细胞表面的 IgE Fc 受体结合。当致敏个体再次接触过敏原时, sIgE 发生交联, 促使上述细胞脱颗粒, 释放组胺、白三烯、过敏性中性粒细胞趋化因子、血小板活化因子、激肽释放酶等化学介质, 这些化学介质可作用于皮肤、血管、呼吸道、消化道等效应器官, 引起平滑肌痉挛、毛细血管扩张、血管通透性增加、腺体分泌增加等过敏性症状。在引起变态反应性疾病的致病因素中 , 气传致敏花粉是导致季节性变态反应疾病的最重要因素。
三裂叶豚草（Ambrosia trifida L.）花粉是当今中国北方地区的重要过敏原，受影响人数众多。而目前临床上对豚草过敏的诊断大都基于豚草花粉粗提取物的皮肤试验和IgE水平的检测。而粗提取物中可能包括致敏成分（allergen，过敏原）、大量的非致敏蛋白和非蛋白成分，成分非常复杂，并且粗提取物中具体的过敏原信息也不明确，这将会对临床诊断的准确性造成影响。因此，明确三裂叶豚草花粉中过敏原的具体信息尤为必要。本实验利用蛋白组学的方法分析并鉴定三裂叶豚草花粉中的过敏原，明确其具体蛋白类型。为临床豚草花粉过敏患者的诊断和脱敏治疗提供理论依据。
2. 材料与方法
2.1 材料
豚草花粉为本实验室留存,特异患者血清于收集就诊于北京协和医院变态反应科门诊患者 ,所有血清均来自花粉粗提物皮肤试验阳性和sIgE检测阳性的患者。所有血清样本的收集均经过相应单位伦理委员会批准，并且本研究也经过南京医科大学第一附属医院伦理研究委员会批准（2015-SRFA-055）。
2.2 主要仪器与试剂
Bio-rad电泳系统(美国Bio-rad伯乐)、凝胶成像及分析系统（Tanon 5200 Multi）为上海天能科技有限公司产品、30%丙烯酰胺溶液为上海碧云天公司产品 、十二烷基硫酸钠 SDS[3250GR500 ]为BioFroxx公司产品 、过硫酸铵 (APS)为上海Sagon Biotech公司产品、三羟甲基氨基甲烷 (Tris)为BioFroxx公司产品 、曝光液（Immobilontrade; Western HRR Substrate Luminol Reagent为Merck公司产品、预染蛋白 Marker（26616）为美国Thermofisher公司产品，HRP标记的羊抗人IgE抗体 、PVDF膜为美国millpore公司产品 。其余均为国产分析纯试剂 。
2.3 豚草花粉粗提液的提取
