- 论文拟研究解决的问题
通过体内实验和体外实验，探究 DT-13 联合拓扑替康（TPT）作用于胃癌细胞 BGC-7901产生协同效应的机制及结果。通过预实验研究，完成瘤株的选择和联合用药方案的确定；进一步探索两药联合作用于肿瘤细胞产生协同效应的机制；再采用动物实验进行体内验证。
- 国内外研究概况
胃癌在世界范围恶性肿瘤发病率占第四位，在肿瘤相关死因中占据第二位。多说胃癌患者就诊时已属晚期，往往无法使用手术治疗。相对于支持治疗，系统的化疗可以改善生存，提高生活质量，但目前尚无标准方案治疗晚期胃癌。近年来，新药的研究和新的联合用药方案已成为研究的热点，当发现新药与已有药物可能存在协同作用时，一般提倡在研发早期便考虑联合用药。前期研究表明，DT-13作为抗肿瘤辅助药物联合TPT起到协同抑制人胃癌BGC-823细胞增殖的作用，使TPT的IC50值下降了50倍以上。在此基础上，我们将进一步探讨DT-13与一线化疗药物TPT联合应用是否可以作为治疗胃癌的有效策略。
- 研究方法
本研究采用DT-13和TPT联合用药，以Hoechst核染色法和Annexin V-PI 双染流式分析的方法检测药物作用后的细胞凋亡情况及具体的凋亡率，同时与单独给药相比较，旨在为DT-13和拓扑替康联合作用于BGC-7901细胞的作用提供实验依据。同时采用Western Blot法检测药物对Caspase-3、Caspase-9、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响，探索DT-13和TPT联合用药的效果及药物作用可能的分子机制，旨在为癌症的化学预防提供新思路和基础研究理论依据。
(1) 联合用药方案的确定：MTT方法检测DT-13对多种肿瘤细胞的抗肿瘤效应，并分别计算IC50值；MTT方法检测DT-13和其它抗肿瘤药物共同作用对肿瘤细胞的抗肿瘤效应，计算联合指数，最终确定最敏感细胞株和协同效果最佳用药。
- DT-13和TPT联合用药对细胞凋亡的实验研究：选择处于对数生长期的人胃癌BGC-7901细胞，药物处理细胞48h后，光镜显微下观察药物对细胞形态的变化，用Hoechst染色法在荧光显微镜下观察药物对BGC-7901细胞核的作用，采用流式细胞术检测药物对细胞凋亡的作用，应用Western blot方法检测凋亡相关蛋白表达水平的变化。
- 文献综述
恶性肿瘤，也称癌症(Cancer)，是严重威胁人类健康的疾病之一，也是造成人类死亡的主要原因之一，全球每年死于各种癌症人数超过800万。胃癌是世界范围内第四大常见肿瘤，癌症患者的死亡率仅次于肺癌，高居第二位。在中国，胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，对人们的健康和生活质量构成严重威胁。在过去的几十年中，尽管化疗药物在癌症治疗中发挥了很大作用，但是由于药物的毒副作用，使得癌症患者的生存质量并不乐观。因此寻求既有抗癌活性、并且低毒的治疗方案迫在眉睫 。
联合用药是利用联用药物之间的协同作用取得比单药更好的效果，作用在靶器官或靶细胞上的效应大于各药物效应的总和，表示多种药物以不同作用机制产生同一效应。在肿瘤治疗中经常使用联合用药，目的在于增强疗效，同时避免高剂量单独用药时对机体产生的毒副作用，还可以逆转因长时间单一用药而产生的耐药性。因此，合理、高效的联合用药策略对于肿瘤的有效化疗具有重要意义。
中药在肿瘤治疗和辅助治疗中的应用已有悠久的历史。从中药和中药复方中发现肿瘤化疗的增效剂是一条有效的途径，且目前已经发现有多种中药的提取物或者单体成分具有这方面的效果。例如：榄香烯为姜黄科植物温莪术的提取物，可广泛应用于恶性胸腹腔积液、多种实体瘤以及脑转移癌，而且榄香烯口服乳还可以用于食管癌、胃癌的治疗，其主要环节在于将肿瘤细胞阻滞在G2/M期，降低其分裂能力，抑制其增殖，并迅速导致凋亡和分化。从中药卫矛科植物雷公藤的根皮分离得到的雷公藤红素具有抗炎和抗癌活性，是因为它可以抑制癌细胞生长，并通过控制细胞的蛋白体酶进而诱发癌细胞凋亡，是一种新型的蛋白体酶抑制剂。有文献报道，中药多糖有免疫调节活性和抗肿瘤作用，如：茯苓多糖、云芝多糖、人参多糖、刺五加多糖、灵芝多糖等，其作用机制多方位、多环节，不仅可以刺激单核-巨噬细胞系统的吞噬功能，促进淋巴细胞增殖转化、促进抗体生成、诱导细胞因子的分泌，活化补体系统，虽不直接攻击肿瘤细胞，但却通过活化受体内的不同免疫应答间接产生抗肿瘤活性，而且还可以直接作用于肿瘤细胞抑制肿瘤细胞的增殖、蛋白质及核酸合成，诱导肿瘤细胞凋亡。临床上与放化疗联合使用后，可适当减少药物剂量，发挥其增效减毒作用。另外，中药复方对预防癌症也起着重要作用，如生脉饮可以改善化疗引起的肝功能损害和骨髓抑制等副作用，提高机体免疫功能，发挥抗肿瘤增效作用。
短葶山麦冬，为百合科山麦冬属植物短葶山麦冬Liriope muscari (Decne.) Baily的干燥块根。气微香，味甘、微苦；有润肺止咳、滋阴清热、清心除烦等功效，传统中医用于与心阴、肺﹑胃相关病症，是一味传统中药。DT-13是从短葶山麦冬中分离提取得到的一个皂苷单体，前期工作筛选证实其具有抑制癌细胞迁移的活性，进一步研究发现DT-13体外具有抑制细胞的粘附和抑制血管新生的作用；体内可以有效抑制乳腺癌和肺癌的转移。因此对其进行研究具有重要意义。
参考文献：
张媛媛，宁华蓉，戚进，寇俊萍，余伯阳《短葶山麦冬皂苷 DT一13研究进展》 Journal of China Pharmaceutical University 2014，45(5)：593—59
