丙肝病毒E2蛋白在酵母细胞表面的表达文献综述

 2023-01-10 15:57:00

HCVE2蛋白在酵母细胞表面的表达实验目的通过分子克隆技术,将丙型肝炎病毒囊膜上的一种糖蛋白E2用酵母展示系统表达在酿酒酵母EBY100的细胞表面,便于后续对HCV中和抗体的研究。

实验方案第一步 HCVE2胞外域基因扩增查阅资料得到编码E2胞外域的基因片段,设计并合成引物,PCR大量扩增目的基因。

第二步 PCR产物纯化将PCR产物进行目的基因提纯。

第三步 目的基因与克隆载体pUCT连接pUCT载体末端连续的T与目的基因末段连续的A进行TA克隆,获得重组质粒。

第四步 重组质粒转化感受态细胞 用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞,再用热击法将重组DNA转入感受态细胞,使用氨苄抗性选择培养基挑选出阳性单克隆,计算转化效率,再继续扩大培养。

第五步 质粒提取将细胞体内大量生长的重组质粒提取出细胞。

第六步 双酶切用在特异位点切割的限制性内切酶将目的基因和载体分离,核酸电泳检验。

第七步 DNA测序将上一步获得的基因产物进行测序,验证是否为HCV E2序列。

第八步 HCVE2基因连接Pct302表达载体第九步 重组质粒转化酿酒酵母EBY100文献综述丙型肝炎发病机理仍未十分清楚,当HCV在肝细胞内复制引起肝细胞结构和功能改变或干扰肝细胞蛋白合成,可造成肝细胞变性坏死,表明HCV直接损害肝脏,导致发病起一定作用。

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