抗肿瘤双特异性抗体Diabody的研究
1.拟研究和解决的问题
血管内皮生长因子( VEGF) 及血管内皮生长因子受体-2( VEGFR-2) 是调节血管生成、内皮细胞增殖和迁移等的关键调控因子。通过阻断 VEGF 与 VEGFR-2 的结合可抑制新生血管形成，而新生血管的形成是肿瘤生长和转移的基础。VEGF/VEGFR-2 是目前报道的最重要的血管生成抑制剂作用靶点，随着人们对 VEGF及 VEGFR-2 功能的不断探索，VEGF/VEGFR-2 及其介导的信号转导通路在肿瘤的发生、发展中所发挥的关键作用也逐渐被人们所认识。
表皮生长因子受体（EGFR）作为一类细胞信号转导的关键因素，其过度表达或高表达已被证明与某些肿瘤存在密切关系。其高表达患者预后差，易发生早期转移，复发时间短，复发率高，存活期短。EGFR 经过人为干预使之降低后可以明确改善癌症患者预后。这就使以EGFR胞外区作为药物作用的靶点，利用配体或抗体将治疗分子运送到高表达EGFR肿瘤细胞的方法成为靶向治疗癌症的一个新思路。
本实验用已经构建成功的抗EGFR/KDR（VEGFR-2）双特异性双链抗体（Diabody,Db）重组载体转化大肠杆菌，进行双特异性抗体的表达及活性研究，以期表达纯化得较高纯度蛋白，研究双特异性抗体活性中希望得到具有双特异性作用的抗体，其活性应不低于各自的单链抗体并具有较好的稳定性。理论获得的双特异性抗体可以同时抑制EGFR和KDR信号通路，为抗EGFR或抗VEGFR抗体双独使用疗效不佳的癌症或者增强抗肿瘤效果提供了很好的临床治疗研究思路。
2.采用的研究手段
1、 抗EGFR/KDR（VEGFR-2）双特异性双链抗体（Db）的表达及制备
已知构建的重组基因有pelB信号肽前导序列，其可以将表达的肽链导入细菌周质空间，所以用渗透压休克法（osmotic shock）提取可溶性蛋白。
2、 抗EGFR/KDR（VEGFR-2）双特异性双链抗体（Db）的纯化
