课题名称羚珠散醇提取物对星形胶质细胞作用的初步研究课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、实验背景羚珠散原是苏州市中医院处方,具有清热安神、化痰开窍等疗效[1]。羚珠散是临床上常用的中成药，其处方由朱砂、琥珀、冰片、胆南星、僵蚕、羚羊角粉等组成，具有清热解毒、定惊安神的功效，其药理作用持久，可有效的防止中枢神经系统病灶的异常放电，减缓患儿出现再发惊厥的现象[2]。小儿热性惊厥（Febrile seizure,FS）常见于6月~ 3.5岁的患儿，FS的发生一般是由于高热引起[3] 。上呼吸道发生感染以及其他疾病导致的感染也极易造成小儿热性惊厥的发生[4]。发生FS的患儿除了发热、抽搐症状外常伴有咳嗽，部分抽搐患儿会伴随短暂性的意识障碍，对患儿的预后效果产生一定的 影响。据有关报道显示[5]，首次出现FS的患儿会伴有30%的复发可能，有热性惊厥既往史再发的患儿，FS的复发率较高。针对频繁发作且无明显好转现象出现FS的患儿，会对其大脑产生不同程度且不可修复的损伤，甚至会导致患儿产生智力障碍、中枢神经系统障碍等[6]。针对小儿热性惊厥的产生，采取及时有效的治疗必不可少。目前 FS 的病理机制尚未明确，目前研究认为，中枢神经系统 (CNS) 内的神经递质或者具有类似于神经介质作用的化学物质不平衡是引起FS的重要原因[7]。离子通道是神经元电活动的物质基础，近年来研究有许多离子通道的突变和热性惊厥有关[8]。儿童热性惊厥状态下，大脑皮质的神经元出现病理性异常放电，进而触发内向电流出现异常，导致离子异常流动[8,9]。当机体出现了高热的状态的时候，机体的神经递质的释放通路以及离子通道的生物学功能都会发生改变随后机体的神经元的兴奋性就会进一步的提升，导致了机体出现了相应的 FS 的症状出现[10]。星形胶质细胞(astroglia，As)也称星形细胞 (astrocyte)，是CNS内主要的胶质细胞。越来越多的研究表明星形胶质细胞不但是单纯的神经支持细胞，而且在中枢神经系统中具有着关键的生理作用，包括维持血脑屏障、维持内环境稳态，参与突触活动、释放神经递质，参与组织修复和神经信号传递、介导神经炎症反应等等。在病理状态下星形胶质细胞可因内环境改变而发生活化 (astrogliosis)，变成反应性星形胶质细胞，主要表现为胞体肥大，数量增殖、细胞变形，炎症介质的高表达等[11]。星形胶质细胞活化是众 CNS 疾病的共同病 理表现。因此是减轻星形胶质细胞活化也是目前研究的关键靶点，而传统中医药对星形胶质细胞的活化、抑制的研究是现今的科学研究的热点。中医药对星形胶质细胞许多功能和作用逐渐被发掘并证实，当前国内外许多研究通过 体内实验和体外实验从不同信号通路探讨中医药针对星形胶质细胞活化的可能作用机制，以期予中医药在治疗神经 系统疾病中能提供新的治疗途径。针对中药有效成分、中药单体以及其他中医疗法对神经系统疾病后星形胶质细胞 活化、抑制作用进行阐述，通过中医药调控星形胶质细胞的活化的机制进行研究总结，为中医药调节星形胶质细胞活化及作用机制的研究提供科学理论依据和参考[12]。羚珠散预防性治疗小儿热性惊厥再发临床疗效满意，虽与西药地西泮片疗效相当，但不良反应少，值得临床推广应用[13]。星形胶质细胞是哺乳动物脑内分布最广泛，也是胶质细胞中体积最大的一类细胞。星形胶质细胞是中枢神经系统内在数量上占绝对优势的一类大胶质细胞，被认为在神经细胞的生长、发育及衰老中起 着重要的作用[14]。星形胶质细胞在神经系统中具有重要作用，目前关于星形胶质细胞的研究报道很多，探究中医药对星形胶质细胞的作用对治疗由星形胶质细胞损伤引起的相关疾病有重要意义[15]。本研究将从细胞水平上以羚珠散醇提取物为例，考察其对星形胶质细胞的毒性作用，探讨羚珠散醇提取物能否调节星形胶质细胞的活动，为后期研究药物抗惊厥机制奠定基础。
二、实验目的和意义1、学习羚珠散醇提物的制备方法；2、学习星形胶质细胞的原代培养及鉴定方法；3、用羚珠散醇提物对星形胶质细胞给药，观察其对星形胶质细胞的毒性作用以及增殖的影响。以此了解羚珠散抗惊厥的作用机制。
三、实验内容1、羚珠散醇提取物的制备：超声法提取；2、星形胶质细胞原代培养及鉴定：运用免疫荧光技术对原代细胞进行纯度鉴定；3、羚珠散醇提物对星形胶质细胞的细胞毒性实验：筛选药物浓度和孵育时间；实验思路：制备所需要的药物-羚珠散醇提物，研究对象为大鼠皮层星形胶质细胞，并通过传代培养提高细胞的纯度，运用免疫荧光技术进行纯度鉴定，拟用纯度95%以上的细胞进行后续实验；用显微镜记录药物给药之后星形胶质细胞的形态变化；最后通过CCK-8检测法摸索羚珠散醇提物的有效浓度及作用时间。
四、参考文献王道生, 陈星织, 芷玉英,等. 羚珠散的药理研究[J]. 中成药研究, 1984(3).白京京, 张文莉, 赵雨薇. 丙戊酸钠与托吡酯治疗小儿复杂性热性惊厥的临床疗效及安全性分析[J]. 四川解剖学杂志, 2018, 26(004):38-39.邝长毅, 姚海峰, 刘镜华. 羚珠散预防性治疗小儿热性惊厥再发的有效性研究[J]. 深圳中西医结合杂志, 2020, v.30;No.268(15):26-28.张润春, 王玉珍, 刘寅,等. 不同剂量左乙拉西坦短期应用防治小儿热性惊厥的效果及对脑电图的影响[J]. 解放军医药杂志, 2019, 031(002):98-101.韩静, 薛莹莹, 张锦波,等. 门诊护理干预用于预防小儿热性惊厥的效果观察[J]. 首都食品与医药, 2019, 000(004):89-89.李贞. 小剂量德巴金防治小儿复杂性热性惊厥的安全性和有效性分析[J]. 辽宁医学杂志, 2019, 033(001):74-76.Iwasaki T ,Toki T ,Nonoda Y , et al. The efficacy of levetiracetam for focal seizures and its blood levels in children[J]. Brain and Development, 2015, 37( 8):773-779.Saghazadeh A ,Mastrangelo M ,Rezaei N . Genetic background of febrile seizures[J]. Reviews in the Neurosciences, 2014, 25(11):1-33.母发光,何海兰,李晶,等.热性惊厥儿童血清脑利钠肽与钠离子水平的临床研究[J].四川医学,2014,23(4):433-435.Lin WY,Muo CH,Ku YC,et al,Increased association between febrile convulsion and allergic rhinitis in children:A nation-wide population-based retrospectivecohort study[J].Pediatr Neurol,2014,50(4):329-333.林祺, 高亮, 秦松. 星形胶质细胞激活与创伤性颅脑损伤研究进展[J]. 中国临床神经科学, 2017,5(1):81-87.秦启杰, 张钊, 张震文,等. 中医药与星形胶质细胞的活化研究进展[J]. 实用中医内科杂志, 2020(8).何伟. 羚珠散预防性治疗小儿热性惊厥再发40例临床观察[J]. 中医儿科杂志, 2018.陈会文, 杨成龙. 星形胶质细胞功能及中药对其作用的影响[J]. 辽宁中医药大学学报, 2013, 015(004):119-121.莫永炎, 邢飞跃, 张宝,等. 星形胶质细胞条件培养液对tbOOH致PC12细胞凋亡的抑制作用[J]. 第一军医大学学报, 2004, 24(9):998-998.
学生签名：年月日指导教师意见：指导教师签名：年月日所在教研室审查意见： 负责人签名：年 月日填写说明1.指导教师意见填写对文献综述的评语，对本课题的深度、广度及工作量的意见和对论文结果的预测；2.所在教研室审查意见包括对指导教师意见的认定和是否同意开题等。
资料编号：[372178]
