药物中苯胺类基因毒性杂质的检测
苯胺类化合物作为一类常见的基因毒性杂质，对人类健康具有严重威胁性，因此需要严格控制药物中该类杂质的限度。由于苯胺类化合物在254nm左右呈现最大紫外吸收，在测定中易与药物中其他成分相互干扰，故难以保证检测的专属性和灵敏度。本课题拟采用高效液相色谱（HPLC）法，选择合适的衍生化试剂，利用衍生化产物的紫外或荧光特性，建立一种快速灵敏、专属性好的苯胺类基因毒性杂质的检测方法，并考虑在此基础上将方法应用于一个或多个药物中苯胺类杂质的含量测定。
一、课题研究背景
（一）课题概况
基因毒性杂质是指能够直接或间接损害DNA，导致基因突变或诱发癌症的物质。其损害作用主要包括诱导DNA突变、染色体断裂、DNA重组及DNA复制过程中共价键结合或插入，也包括通过激活细胞产生基因毒性杂质而产生的突变[1-2]。基因毒性杂质主要来源于原料药合成过程中的起始物料、中间体、试剂及反应副产物。此外，药物在合成、储存或者制剂过程中也可能会因降解而产生基因毒性杂质。近年来，随着基因毒性杂质法规的逐步完善，美国食品药品监督管理局（FDA）和欧洲药品管理局（EMEA）等部门对基因毒性杂质的监管要求越来越高。药物中基因毒性杂质如果控制不当，可能会导致临床隐患，同时也会影响新药上市时间。美国FDA及欧洲EMEA均提出采用毒理学关注阈值（thresh-old of toxicological concern，TTC）作为基因毒性杂质的可接受限度[3-4]。在临床开发阶段，采用阶段化TTC作为短期服药时间内基因毒性杂质的限度。基因毒性杂质的最大限度是TTC与药物最大日服用剂量的比值，同时基因毒性杂质大多化学性质活泼、稳定性差，这对分析方法提出了很高的要求。
苯胺类化合物是药物中一类常见的基因毒性杂质，其作为合成中间体被广泛地使用在染料、香料、合成树脂、农药及药品的生产过程中[5]。苯胺类物质的基因毒性主要是通过代谢活化生成碳正离子和碳氧自由基等活性较强的中间体，再与DNA发生烷基化反应或者导致DNA其他病变[6]。另外，更有部分芳香胺对人类具有高毒性，已经被确定为致癌物质[7-9]。目前苯胺类化合物的检测方法多为衍生化-气相色谱法[10]、液相色谱法[11]、色谱-质谱联用技术[12-13]等，但文献报道的方法多应用于环境样品的研究，方法专属性和灵敏度无法满足药物中苯胺类杂质的检测需求。
根据以上现状，本课题组希望能够开发一种针对药物中苯胺类基因毒性杂质的快速灵敏、专属性好的检测方法。
（二）课题研究意义
现实意义：一方面，近些年，在产品的上市申请中，由于基因毒性杂质控制不合规而导致的缺陷越来越多[14-15]。充分的基因毒性杂质研究已经成为产品能否上市的关键。苯胺类物质作为一种常见的基因毒性杂质，在审查过程中被列为重点监测对象。若课题进展顺利，则可为监管机构提供一种快速准确的检测苯胺类基因毒性杂质的方法，以用于新药审批过程中该类基因毒性杂质的监测，提高新药审批的效率。
