开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、背景
研究目的基因在疾病发生发展中是否发挥重要作用及相关分子机制通常需要观察细胞中的目的基因沉默或者过表达后对下游蛋白表达变化和细胞生物学变化，RNAi是这类研究的一种重要的技术手段。RNAi是利用双链RNA对靶基因mRNA特异性结合，引起转录后同源基因降解的一种转录后基因沉默的现象。利用慢病毒侵染细胞，使设计的siRNA序列稳定存在于宿主细胞的基因组中，产生具有发卡环结构的shRNA使靶基因沉默，拥有高特异性、高稳定性、高效性、可遗传性等特点。
本实验的目的是进行shRNA茎环结构的设计、研究退火条件、慢病毒转染条件和病毒浓缩纯化方法等，构建敲低的质粒，包装到慢病毒中，建立可稳定在宿主细胞中表达的慢病毒体系。
实验室前期基于肿瘤免疫评分算法分析了肝癌中每个患者的肿瘤组织中免疫细胞丰度，然后进一步使用WGCNA算法分析出了与巨噬细胞M2型密切相关的基因，其中ZNF207相关性最高。进一步通过TCGA的数据分析发现，ZNF207在肝癌样本中表达显著升高，并且高表达患者的总生存期和无进展生存期都要显著低于低表达患者。于是实验室希望通过实验进一步研究该基因在肝癌及巨噬细胞中的作用，实验室前期的病毒载体构建、包装和纯化都是由商业公司完成，我们希望以构建靶向ZNF207的敲低慢病毒为契机，建立起实验室的靶向敲低慢病毒体系，并在此基础上初步研究ZNF207的药效。
二、研究内容
1.慢病毒构建
1.1.设计序列
针对ZNF207基因使用使用sigma和Invitrogen Block-iT设计shRNA序列，并且使用不同的茎环序列，对比不同茎环序列对敲低效率的影响。
剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付
