一、课题背景
门冬氨酸钾镁注射液（potassium aspartates and magnesium aspartates)是门冬氨酸钾盐和镁盐的混合物，为电解质补充剂。门冬氨酸是体内草酰乙酸的前体，在三羧酸循环中起重要作用。同时，门冬氨酸也参与鸟氨酸循环，促进NH3和CO2的代谢，使之生成尿素，降低血中NH3和CO2的含量。门冬氨酸与细胞有很强的亲和力，可以作为钾离子和镁离子进入细胞的载体，使钾离子重返细胞内，促进细胞除极化和细胞代谢，维持其正常功能；镁离子是生成糖原及高能磷酸物质不可缺少的物质，可增强门冬氨酸钾盐的治疗作用。门冬氨酸钾镁主要用于低血钾症、洋地黄中毒引起的心律失常以及心肌炎后遗症、充血性心力衰竭、心肌梗死的辅助治疗。[1-3]
查阅文献，门冬氨酸钾镁注射液门冬氨酸的含量测定采用的是高效液相法，但其分析方法为：流动相为0.025mol/L磷酸二氢钾:乙腈按95:5的比例混匀，使用C18柱进行分析，检测波长213nm。[4]该研究发现此分析方法对门冬氨酸响应度高，分离度好，灵敏性强，但该方法不能用于对待测物杂质的分离，不应用于有关物质的检测和定量分析，猜测可能是流动相极性过强所致的不适用，所以本次实验考虑进一步改进门冬氨酸的高效液相分析方法。曾有研究人员做过4种门冬氨酸钾镁注射液的质量分析，其中门冬氨酸含量测定所用的方法为色谱柱是C18柱，流动相是乙腈:30mol/L十二烷基硫酸钠（含0.1%三乙胺，磷酸调节pH至2.5）=30:70，检测波长为210nm，该检测方法可以精确的测出门冬氨酸的含量且操作简便，稳定性好。[5]但该方法不能用于同时分析出注射液中杂质峰的位置和相应含量，未做出门冬氨酸钾镁注射液的有关物质的鉴定和定量分析，所以此法对于本次实验只能仅作参考。而色谱方法为采用InertsilODS-SP色谱柱 (5mu;m, 4.6 mmtimes;250 mm) , 流动相为乙腈:30 mmol·L-1十二烷基硫酸钠(加三乙胺0.85 mL, 用磷酸调pH至2.5) (150:850) , 流速为1.0 mL·min-1, 检测波长为210nm, 柱温为40℃时，门冬氨酸有最佳吸收峰，该方法操作简便、准确、稳定性好, 可作为门冬氨酸钾镁注射液中门冬氨酸的有效检测方法。[6]但该色谱条件不能检测出其他杂质峰，不能用于有关物质的鉴别。不能达到对门冬氨酸钾镁木糖醇注射液进行有关物质分析的目的。
门冬氨酸注射液类的色谱分析方法经查阅发现少有门冬氨酸钾镁木糖醇注射液的有关物质研究和含量测定，学者们较多关注其他类门冬氨酸注射液的相关物质分析，包括门冬氨酸鸟氨酸注射液和门冬氨酸洛美沙星注射液。对于门冬氨酸鸟氨酸注射液进行的含量测定中的色谱方法设定为Kromasil100-5NH2柱，流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液:乙腈=50:50，检测波长210nm。[7]此方法可以很好的分离开门冬氨酸鸟氨酸和杂质，但对门冬氨酸钾镁木糖醇注射液的有关物质定量和鉴别效果未知，方法与卫生部标准中规定的门冬氨酸钾镁注射液的检测方法相似，流动相极性较之低，可能对本次实验中所想要达到的杂质峰的分离有效，具有参考价值，可以在实验中进行尝试。其次在HPLC法测定门冬氨酸洛美沙星注射液的含量和有关物质的相关文献中发现，当色谱条件为Diamonsil柱，流动相为乙腈:磷酸盐缓冲液（称取磷酸二氢钾6.7g，磷酸2.8ml，加水稀释至1000ml):0.05mol/L四丁基溴化铵溶液=19:81:4，检测波长288nm时，峰形和分离度均十分理想，主峰保留时间在5.5分钟。[8]参考以上文献，改变流动相极性或者添加四丁基溴化铵可改善实验条件下注射液中有关物质的分离。
《美国药典》（USP40-NF35）对于门冬氨酸的分析方法规定为液相（LC）方法，检测器为紫外分光检测器，流动相为0.008N硫酸。[9]该方法是对门冬氨酸原料药的质量分析进行的规定，能有效分离出门冬氨酸内杂质（富马酸、马来酸、苹果酸等）峰并对其进行分离，但因为不能检测出门冬氨酸的吸收峰，所以不能同时对门冬氨酸钾镁木糖醇注射液进行有关物质的定量和鉴别，对本次实验实用性不大，因此仅作参考用。
经查阅文献和药典得出高效液相色谱法对门冬氨酸注射液进行有关物质研究时，流动相中有机相的比例对有关物质分离有明显影响，四丁基溴化铵有助于改善峰形，其比例和磷酸盐缓冲液的浓度对有关物质分离影响较小。[8]猜测略增加乙腈和磷酸盐缓冲液的比例可以改善主成分峰形，使主峰和相邻杂质峰之间分离度增加，实验中将会针对此猜测进行相关操作来验证这一猜测。
目前市场上门冬氨酸钾镁的制剂种类比较多，生产的厂家也众多，不同厂家产品的处方不尽相同，因而产品的生产工艺和质量存在一定差异，可能会对临床疗效产生影响。但已知研究、文献资料和相关规定中多针对门冬氨酸钾镁木糖醇注射液的含量测定，而有关物质鉴别和定量的相关研究却较少，因此需要对制剂质量进行全面的评价。在结合各国药典和文献的分析方法的基础上，选用一个厂家生产的三个批号的门冬氨酸钾镁木糖醇注射液进行了本次质量评价。
- 要解决的问题
目前门冬氨酸钾镁木糖醇注射液没有有关物质检测方法,为了保障用药安全,本研究拟建立其有关物质控制方法。
- 可行性分析
1.本实验室拥有该研究所需的HPLC及各种型号色谱柱。
2.本实验室对于此类相关实验类型经验丰富，曾进行过五维他口服液中不明杂质的研究。
