一、研究问题：
安替安吉肽是针对肿瘤血管标记性分子来设计新型血管生成抑制剂系列突变体，通过筛选得到了的体内活性高、靶点明确、制备工艺简单的多肽，通过大量的试验，其含有18个氨基酸并具有整合素亲和性的一种高效血管生成抑制多肽。
单抗的制备有很多方法，主要分为体内和体外两大类，目前以体内法为主。体外法制备单克隆抗体简单,收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体,尤其要同时制备多种不同种类单抗时适用,但杂交瘤细胞培养上清中抗体浓度较低,不能超过特定的细胞浓度,且每天要换培养液，代价较高。一般用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。杂交瘤细胞具有从亲代得来的肿瘤细胞的遗传特性，如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤细胞的小鼠,杂交瘤细胞就开始无限繁殖,直到宿主死亡。产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体,这种抗体的效价往往高于培养基细胞上清液的100-1000倍。体内法可以克服体外法的一些限制,腹水中含有高浓度的单克隆抗体产生。
本实验采用体内法制备单克隆抗体及后续的纯化和效价测定，并且摸索了在小鼠腹腔内注射不同体积液体石蜡、不同杂交瘤细胞数目与单克隆抗体产量的关系。
- 研究手段：
1.安替安吉肽单克隆抗体腹水的制备：
(1)注射细胞的前一周,五只小鼠腹腔内分别注射不同体积液体石蜡。
(2)培养细胞,等细胞处于对数期时将细胞培养物移入50mL离心管,1000r/min离心5min,弃上清,细胞重悬于50mL不含FBS的PBS中,离心洗涤,弃去上清,再清洗两次,弃上清后用5mL PBS将细胞重悬。(动物会对培养基中含有的血清产生抗体,因此要用无血清的缓冲液清洗细胞)
(3)计数细胞,活度应接近100%。
(4)用PBS将细胞配成2.5X106/mL,每只小鼠腹腔内注入上述细胞悬液2mL,约1-2周后形成腹水。
(5)采集腹水时一只手从背部抓牢小鼠,使小鼠腹部皮肤紧张,另一只手把1个18 G的针头插入腹腔内1-2 mL,注意针头应插入腹腔的左侧或右侧下方,以避开腹腔上部的重要器官及腹中部的大血管,用15 mL的离心管收集腹水。
