一、研究目的与意义
我国蝎资源极为丰富，仅东亚钳蝎一个种类就分布在长江以北到辽宁铁岭以南的宽广区域。提取蝎毒，能更有效地利用这一宝贵的生物资源，必将成为我国广大产蝎区农民的新的经济来源。[1]全蝎为钳蝎科动物东亚钳蝎Buthus martensii Karsch的干燥体，性味辛、平，有毒，归肝经，具有息风镇惊、攻毒散结、通络止痛功能，临床用于小儿惊风、抽搐痉挛、中风口涡、半身不遂、破伤风、风湿顽痹、偏正头痛、疮疡、瘰疠等症状。[2]蝎毒主要由非蛋白和蛋白质两部分组成。蝎毒的主要活性部分是蛋白质，多为20~80个氨基酸组成的多肽，活性蛋白又因作用不同分为毒性蛋白和酶蛋白，蛋白质一般属碱性。血管内皮细胞可生成、分泌或释放组织型纤溶酶原激活物（t-PA），激活无活性的纤溶酶原（PLG）转变为有活性的纤溶酶（PL），进而使纤维蛋白或者纤维蛋白原降解，起到抗栓、溶栓作用。通常血浆中t-PA含量甚微，仅保持着血液畅通，不足以溶解循环中的血栓。[3]相关实验证明蝎毒及蝎毒肽能够抑制兔血小板聚集，延长大鼠劲动脉血栓形成的时间，促进大鼠血管内皮细胞释放PGI2，以及明显提高大鼠血浆中纤溶酶（PL）的活性和优球蛋白溶解活性（ELT）等一系列实验，得出蝎毒具有纤溶性的论断，且疗效已在临床得以初步证实。[4]研究溶栓要的目的是使栓塞的血管再通、血块溶解，重建血流，降低病死率。面对目前临床急需，特别是从血管血栓性疾病尤以心肌梗塞、脑卒中、短暂性脑缺血发作和不稳定性心绞痛等缺血性疾病的防治，减少非致死性再梗塞和降低非致死性中风复发率等要求，渴望有不增加脑出血或全身性溶血、出血危险且高效，半衰期长，可以有多剂型多途径投药，毒副作用第，药源丰富，生产工艺不太复杂，价格适宜，便于广大患者选用的天然药物问世。蝎毒及蝎毒多肽制品的抗栓、溶栓作用研究为其临床应用和进一步开发提供了科学依据。[3]
二、国内外研究现状
70年代人们逐渐认识到溶栓在血栓性疾病治疗中的重要性。80年代以来，组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（scu-PA）[5]1994年,吕欣然等首次报道蝎毒对大鼠有纤溶作用。作者为从蝎毒中寻找低毒高效的纤溶组分，对蝎毒蛋白进行分离纯化，并对其分离后的多种蛋白组分进行纤溶筛选。[5]又用CM-Sephadex C-50进行离子交换层析，透析脱盐后得到纤溶活性较强的组分。实验结果说明，分离成分有明显激活纤溶系统作用，其机制涉及血管内皮细胞释放PA活性增加；进一步促使纤溶酶原转化为纤溶酶的途径增多，而且能促进内皮细胞释放PGI2，改变TXA2/PGI2和t-PA/PAI等功效，再用毛细管电泳技术及蛋白纯化系统进一步分离纯化出3个峰。实验发现，纯化物有促进内皮细胞更多地释放t-PA，抑制释放PAI-1或兼而有之等更广泛的纤溶作用。[4]
三、研究方法和手段
实验思路：蝎毒采集——提取——活性组分分离纯化——结构测定分析——功能机制研究
（一）采集：电刺激取毒法：两手分拿起两只镊子，一支夹住蝎子尾部（后腹部第一节处），另一支夹住后腹部第五节，但不可用力过猛，过大，确保提毒蝎子的安全。上述工作准备之后，应先做蝎子精确调节脉冲幅度试验，调节时应使信号慢慢从弱到强，即是从旋钮低数字向高数字转动，直到在无伤害蝎子正常排毒为止。在脉冲旋钮适合下，再通电刺激蝎子毒针约1~2s，蝎子便自动排除毒液。一般电刺激毒液先后有变化，第一滴蝎毒往往呈清澈透明，然后呈乳白色，最后粘液状即可中止。蝎子提毒一般间隔2~6周（采集周期21天，室温25℃）还可连续取毒，但不可过频，取毒后尽快进行真空干燥或冷冻干燥制成干毒，保持活性，保干贮藏。（刺激频率为128赫，电压为6~10伏）[6]
(二)提取：匀浆提取：称取冻干蝎粉10g，加入10倍量水，高速匀浆反复3次，每次20~30s，间隔暂停几秒，3500r/min离心10min，取上清液，滤过，残渣继续加水重复匀浆提取一次，离心，滤过，合并2次提取液，定容至250ml，备用。[2]
（三）分离纯化：水提醇沉法——Sephadex G-25凝胶色谱层析——DEAE Sephadex A25离子交换层析——高效液相色谱纯化脱盐——冷冻干燥[7,8,9]
（四）结构测定分析：串联质谱法
