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炉甘石洗剂微生物限度方法学验证
炉甘石洗剂作为一种能够快速收敛保护皮肤，暂时性治疗急性瘙痒性皮肤病的常用外用洗剂一直受到人们的青睐。且其对皮肤刺激性小，治疗效果显著，是传统的皮肤外科用药，被临床用于治疗荨麻疹、皮肤肿胀等多种皮肤炎症，可以说是应用最广泛的外用洗剂之一。正因如此，炉甘石洗剂的安全有效性就显得更加重要。
炉甘石洗剂的主要成分为锻炉甘石，氧化锌及甘油。根据2015版《中国药典》记载，洗剂系指含有原料药物的溶液、乳状液或混悬液。该品是供清洗无破损皮肤或腔道用的液体制剂。《中国药典》2015年版四部规定，洗剂应进行“微生物项目”的检查，并规定需要进行“需氧菌总数、霉菌及酵母菌和控制菌（金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌）” 的检查。相关指标如下：
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给药途径 |
需氧菌总数 （cfu/g、cfu/ml或cfu/10cmsup2;） |
霉菌和酵母菌总数 （cfu/g、cfu/ml或cfu/10cmsup2;） |
控制菌 |
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耳用制剂和皮肤给药制剂 |
10sup2; |
10sup1; |
不得检出金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cmsup2;） |
经查阅文献资料，发现煅炉甘石对部分微生物有抑制作用，若使用检测方法不当，很可能会发生假阴性。若患者凑巧使用了误检合格的产品，则有可能引起细菌感染。所以一个好的、有效的测定方法对炉甘石洗剂的质量至关重要。
目前而言，用于微生物限度测定常用的方法为：平皿法，直接接种法，培养基稀释法以及薄膜过滤法。常用的平皿法及直接接种法一般用于无内部影响的药物微生物限度测定。就炉甘石洗剂而言，因其自带抑菌性，所以这两种方法并不适合。对于抑菌效果一般或较低的药品来说，培养基稀释法可以通过降低抑菌成分浓度，减少抑菌效果从而测得较为准确的微生物限度数据。但炉甘石的抑菌效果较为明显，因此也不适用。对于抑菌效果较强的药物品种，稀释法对其干扰较大，因此大多数所采取的方法是薄膜过滤法。
薄膜过滤法是2010版药典中新添加的一种微生物限度测定方法，作为目前广泛使用的一种测试方法，因其培养效果好，其他因素影响较小，被广泛应用于药品的微生物限度测定中，且测定方法日益完善。薄膜过滤法一般使用滤膜孔径不大于0.45mu;m的除菌滤膜，直径一般为50mm，滤膜材质应保证供试品及其溶剂不想想微生物的充分截留为主。 使用前对滤膜进行灭菌。 取含有一定量供试品的供试液经滤膜过滤后, 用冲洗液冲洗滤膜, 每张滤膜每次冲洗量为 100mL, 总冲洗量不超过 1000mL 。
在进行薄膜过滤时，应先将供试液振摇均匀，再将供试液加入置放有冲洗液的滤罐中混合均匀再进行减压抽滤，并在每次抽干之后进行第二次冲洗，冲洗次数过少则难以将抑菌成分降至影响限度之下。除薄膜过滤之外，离心沉降集菌也是一种去除抑菌物质的方法。通过高速离心使待测样品分层再进行取样以达到降低抑菌性的作用。但使用上述方法进行限度测定之前都应验证回收率。据《中国药典》2015版通则1105条“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”中“抗菌活性的去除或灭活”中记载：若实验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌落数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性：（1）增加稀释液或培养基体积；（2）加入适宜的中和剂或灭活剂；（3）采用薄膜过滤法；（4）上述几种方法的联合使用。所以只有当回收率测定结果大于50%，该方法才适用。回收率计算方式如下：
薄膜过滤对操作也较为要求。从进入无菌室起就应注意各种操作以免对实验结果产生影响。从取样，处理，到实验中超净台的预处理，取样，过滤，取滤纸以及贴培养基都应尽可能的减少操作问题，以减少染菌概率，优化实验结果。
本次课题研究内容主要是对炉甘石洗剂的微生物限度方法学进行验证，以测定薄膜过滤微生物限度测定法能够准确对炉甘石洗剂进行微生物限度测定并尽可能不受到炉甘石自身抑菌性的影响。方法验证的依据为：2015版中国药典四部微生物限度检查方法验证试验。因炉甘石洗剂中含有炉甘石粉末及氧化锌粉末，若直接进行薄膜过滤法则会导致粉末附着于薄膜上，不利于验证。因此需采用灭菌的漏斗及灭菌的脱脂棉对供试液进行过滤，以除去炉甘石粉末及氧化锌粉末。主要操作流程如下：
1.制备试验用菌液
2.对计数培养基进行适用性以及计数方法进行检查和验证（需氧菌、霉菌及酵母菌）
3.分供试组、菌液组及空白对照组三组进行对照验证试验
4.上述试验重复进行共三次
5.计算回收率，判断是否处于0.5-2的范围之内，若符合，则满足要求
试验过程中应细心，谨慎的求证该测定方法的可行性，对于试验中需涉及的操作都应认真完成，尊重试验数据以及实验偏差；若验证实验中出现未接触过的问题，应大胆猜想，细心求证，积极思考的解决，以更好的完成该验证课题。作为人们日常用的皮肤洗剂，其质量监控的方法验证万万不可大意。
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资料编号：[380207]
炉甘石洗剂微生物限度方法学验证
炉甘石洗剂作为一种能够快速收敛保护皮肤，暂时性治疗急性瘙痒性皮肤病的常用外用洗剂一直受到人们的青睐。且其对皮肤刺激性小，治疗效果显著，是传统的皮肤外科用药，被临床用于治疗荨麻疹、皮肤肿胀等多种皮肤炎症，可以说是应用最广泛的外用洗剂之一。正因如此，炉甘石洗剂的安全有效性就显得更加重要。
炉甘石洗剂的主要成分为锻炉甘石，氧化锌及甘油。根据2015版《中国药典》记载，洗剂系指含有原料药物的溶液、乳状液或混悬液。该品是供清洗无破损皮肤或腔道用的液体制剂。《中国药典》2015年版四部规定，洗剂应进行“微生物项目”的检查，并规定需要进行“需氧菌总数、霉菌及酵母菌和控制菌（金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌）” 的检查。相关指标如下：
