研究背景:
诸多临床前和临床研究证实抗血管生成药物可短暂地使肿瘤血管恢复并接近正常化,且可改善某些化疗药物的治疗效果。血管正常化理论解释联合用药的协同作用上得到国际越来越广泛的认可,在制定临床联合治疗方案中有广阔的应用前景。前期发现参麦注射液可增加紫杉醇、5-FU等化疗药物在肿瘤细胞内的蓄积,且具有抗血管生成的作用,但具体机制不明。本课题拟研究参麦注射液对结肠癌血管生成的影响及其对化疗药在实体瘤内药动学行为的变化规律及其调控机制,为临床上制定更为合理的联合用药方案提供科学依据。
实验目的:
1.阐明参麦注射液促肿瘤血管正常化的作用及机制
2.阐明参麦注射液是否通过促血管正常化作用影响化疗药在肿瘤组织内的药动学行为。
实验方法:
1.细胞培养方法
人结肠癌细胞株Caco-2和LoVo购于美国菌种保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC,Rockville,MD),人乳腺癌细胞株MCF-7及人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR购于中国医学科学院天津血液病研究所(天津,中国),细胞培养在37C,含5% CO2的环境中,培养液为DMEM高糖(4.5 g/L)培养基和RPMI 1640培养基,含10 %胎牛血清(FBS),1 %非必需氨基酸,1 % L-谷氨酰胺以及青霉素62.5 mg/L,链霉素100 mg/L,细胞生长于T-25细胞培养瓶中,2至3天更换培养基一次,待细胞生长至90 % 融合时进行传代。
2. MTT实验
取对数生长期的结肠癌和乳腺癌细胞,用0.1% 胰酶消化细胞,离心后用完全培养基重悬细胞,血细胞计数板计数,以1104个/孔接种于96孔培养板中。24 h后,待细胞基本贴壁后更换培养基,每孔加入含药无血清培养基200 l。Caco-2和LOVO细胞上5-FU的给药浓度为:0.03,0.1,0.3,1,3 ,10M ,SMI和5-FU联合用药的浓度为1l/ml和2l/ml。每种细胞同时设置溶剂对照组(0.1% DMSO),各组均为6个复孔。给药后细胞培养板置于培养箱中,于37C,含5 % CO2,相对湿度90% 的环境中培养,48h后每孔加入MTT溶液20 l,继续培养4 h,之后弃去含药培养基并用吸水纸吸干,每孔再加入150 l DMSO,37C 温孵10 min,待结晶紫完全溶解后,用酶标仪于570/695 nm测定吸光度值(A)。各给药组的细胞生长抑制率计算公式如下:
