开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 研究背景:
在人类和啮齿类的哺乳动物中,骨骼肌的质量约为40%,骨骼肌是机体摄取和利用葡萄糖最大的组织,85%的葡萄糖在骨骼肌中被摄取和利用。因此,骨骼肌作为一个重要组织,也是众多相关研究的主要靶点。骨骼肌的生长、发育和代谢是通过一系列细胞外和细胞内信号相互整合,相互协调,共同发辉作用。哺乳动物丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(Protein kinase B, PKB)最初被发现是因为与鼠类胸腺瘤逆转录病毒有同源性,随后被证明是一类动物丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,蛋白结构和生物学活性与PKA(Protein kinase A)和PKC(Protein kinase C)相似。
二、研究目的
综合国内外关于AKT2的研究报道,拟通过动物模型阐明AKT2在骨骼肌发育过程中的作用和机制,为临床应用提供研究基础。
三、研究方法:
雄性AKT2基因敲除(AKT2 KO)小鼠和同窝出生野生型(WT)对照,小鼠给予3个月正常饮食。观察AKT2 KO和WT小鼠体型,测量小鼠体重/净重、骨骼肌重量以及糖代谢等指标。通过Masson切片染色,观察骨骼肌细胞的面积,探索AKT2对小鼠骨骼肌发育和功能的影响。提取C2C12细胞中RNA和蛋白质,研究AKT2对小鼠骨骼肌发育的作用机制。
- 实验材料
4.1动物
野生型和AKT2敲除小鼠,清洁级,在12h昼夜交替、25℃恒温通风、50%-60%湿度的动物房内饲养,自由进食和饮水。
4.2试剂
葡萄糖、小鼠血清胰岛素检测试剂盒、苏木素-伊红染液、Masson染色试剂盒、异氟烷、4%多聚甲醛、水合氯醛、二甲苯、环保型GD固定液、注射用无菌生理盐水、石蜡、PBS、无水乙醇、氨水、液氮、中性树胶
