开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)背景结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是全球第三大癌症,研究表明大部分早期的CRC可通过手术治愈,而晚期转移性CRC(IV期)大部分不可治愈。
因此,针对CRC的发生发展机制进行预防的研究,以及探明CRC转移的分子机制和鉴别出新的CRC生物标志物有利于改善患者的生存率。
高度炎症性微环境中上皮细胞的增殖会引起细胞突变和肿瘤转化,肠道炎症小体失调是造成炎症性疾病和肠道疾病的原因之一。
黑色素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2,AIM2)蛋白可作为细胞内dsDNA感受器感受病原体及异常双链DNA,从而引发炎症反应,此外有研究表明,AIM2通过炎症小体非依赖途径抑制小鼠结直肠的发展。
研究方法1.细胞培养1.1细胞的复苏将冻存的人结直肠癌细胞从液氮中取出,迅速置于37℃恒温水浴锅中,快速震摇,使其在1 min内融化,随后在无菌超净台内操作,用移液枪将解冻的细胞悬浮液转移至含5 mL相应的培养基内,离心机内1000 rpm,5分钟,弃上清,用6 ml对应培养基将细胞重悬,复苏完成。
1.2细胞的冻存冻存液配制:各细胞对应培养基 : FBS : DMSO=8 : 1 : 1。
将人结直肠癌细胞培养液移入15 mL的离心管中,1000 rpm离心5 min,弃上清,随后取冻存液,轻轻吹打细胞,制成悬浮细胞液,以1.5 mL/冻存管的比例将悬浮液移入冻存管中,并用封口胶封口,程序性降温冻存。
1.3细胞的培养本实验所用人结直肠细胞均为贴壁细胞。
将贴壁生长密度处于30 % ~ 50 %的细胞接种于玻璃培养瓶中,将玻璃瓶放置于5 % CO2、37 ℃恒温的培养箱中进行培养。
