产普鲁兰酶重组菌株的发酵条件优化
一、普鲁兰酶的基本性质
普鲁兰酶是一种能够专一性切开支链淀粉分支点中的alpha;-1,6-糖苷键,从而剪下整个侧枝,形成直链淀粉的一类脱支酶。该酶能将最小单位的支链分解,最大限度地利用淀粉原料,因此在工业上有着重要应用价值,是一种需求量较大的酶类。最初,研究者发现这种酶能够水解普鲁兰糖的alpha;-1,6-糖苷键,故称其为普鲁兰酶它在改善淀粉酶对淀粉的作用效果、提高淀粉利用率、降低原料消耗、提高产品质量及,开发新的产品方面有着相当巨大的价值,在淀粉加工工业中有着重要的用途和良好的市场前景。普鲁兰糖中文亦译为茁霉多糖、出芽短梗抱糖、普聚多糖,该糖是出芽抱梗霉产生的胞外多糖,以一,一糖昔键结合麦芽糖构成同型多糖为主,即葡萄搪按一,一糖营键结合成麦芽三搪,两端再以一,一糖昔键同另外的麦芽三糖相结合,如此反复连接而成高分子多糖。[1]
二、普鲁兰酶的酶学性质及酶活测定
2.1酶学性质
耐热普鲁兰酶经过分离纯化,经电泳检测为纯酶后,对酶学性质进行了研究,主要包括最适作用温度和热稳定性、最适和稳定性、金属离子依赖性、酶促反应的动力学常、酶的底物特异性等方面的研究。
菌株所产普鲁兰酶的最适温度为50℃,在温度30℃一50℃的范围内,酶活性随着温度的升高而增大,当温度超过50℃时,酶活性会迅速降低, 酶的最适作用为,在为一之间该酶都具有较高的活性,酶活性变化不大。且该酶一之间仍以上的活性。说明该酶在弱酸到强碱的范围内都有较高酶活,该酶使用范围较广。酶在55℃至60℃之间保温20min,酶活力比较稳定,仍有较高的活性。但是温度高于60℃,酶就比较容易丧失活性。酶在6.0一9.0范围内保持较稳定的活性,当低于6.0,酶活较低,可以认为是一个碱性酶。
该酶米氏常数Km值为0.00775mg/ml,相对于其他普鲁兰酶而言较低,说明该普鲁兰酶对底物具有较好的亲和性,最适底物在较低浓度就能达到较好的催化效果。钙锰镁离子对酶有较强的激活作用和对酶有一定的抑制作用,其中,对酶的抑制作用较强。各淀粉原料作为底物的酶活力大小为普鲁兰糖>可溶性淀粉>糯米淀粉>玉米淀粉>支链淀粉>马铃薯淀粉。因此,菌株所产普鲁兰酶属于碱性酶,因为该酶的活性较高,与底物亲和力较强,可在洗涤剂制造加工等工业应用方面有很大的前景。粉支链淀粉马铃薯淀粉。因此,菌株所产普鲁兰酶属于碱性酶,因为该酶的活性较高,与底物亲和力较强,可在洗涤剂制造加工等工业应用方面有很大的前景。[2]
普鲁兰酶分类
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