中国药科大学毕业论文开题报告
论文题目：龙骨马尾杉的生物碱成分的分离提取
随着社会的发展，人口老龄化速度正在加快，与之相当的老年痴呆症的发病率也相应上升。据国家药监局南方医药经济研究所所做的一项调查统计表明，目前中国约500万AD患者，因此，寻找有效的药物预防和治疗阿尔兹海默症已经成为药物学家和临床医学工作者的迫切任务。而神经药理学研究表明，在AD病人中，学习和记忆能力的三十余乙酰胆碱能神经功能的下降有直接的关系，所以目前的治疗策略多数集中在胆碱能替代疗法，也即是寻找新的中枢拟胆碱药。其中乙酰胆碱酯酶抑制剂是目前研究最多并广泛应用于临床的一类药物。而在1985年由徐择邻等中国科学家从蕨类植物——石杉科马尾杉属的华南马尾杉中首次分离的到石杉碱甲（huperzine A）是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，对于重症肌无力，记忆力衰退和阿尔兹海默症具有较好的效果。目前在国内石杉碱甲的片剂已经通过卫生部审批上市。
近年来石杉碱甲的药理作用越来越受到重视，对于它的研究也越加深入。随着石杉碱甲被分离并广泛应用于临床，人们对其需求量越来越大。而由于石杉碱甲仅被发现存在于石杉科植物中，但石杉科植物是现存的最古老的蕨类植物类群之一，生长极其缓慢，所以对石杉碱甲的研究造成了一定的影响。因此，发现新的高效提取分离石杉碱甲的方法，以及寻找具有与石杉碱甲类似活性的物质从而更好的治疗更多的疾病迫在眉睫。本次实验目的在于从龙骨马尾杉这一石杉科植物中寻找具有与石杉碱甲活性类似的生物碱，并通过各种化学分析方法对其进行提取分离和制备，通过各种光谱和色谱方法对其化学结构进行分析。最终得到一种新型的具有活性的化合物。再经进一步的临床试验以检验是否有效。
本次实验首先需要制备龙骨马尾杉中生物碱的总碱。石杉生物碱的提取可分为酸水溶液提取法和有机溶剂提取法。常见的提取方法有酒石酸浸泡、盐酸渗漏、Soxhlet抽提以及乙醇回流提取等。然后将所得生物碱总碱通过柱层析的方法进行分离，依次以不同比例的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂洗脱。各流份以薄层层析检查（展开剂），含单一成分的流份合并，旋转蒸干后加二氯甲烷或甲醇溶解从而得到浓缩流份。取少量样品，经进一步稀释制备后用反向色谱柱进行HPLC分析，由于生物碱为碱性，尽管使用反相硅胶柱仍有可能生物碱会与硅胶的醇羟基发生键和反应，所以以醋酸铵为缓冲盐，以甲醇-醋酸铵体系进行HPLC分析，避免硅胶柱被破坏以及实验结果受到影响。通过对HPLC色谱图的分析，对各种物质在不同波长下的紫外吸收的分析，从中寻找到可能的有活性的石杉碱甲类似物，或是新型的有活性的化学物质。将此化合物制备后对其化学结构进行分析，通过红外光谱仪，核磁共振仪，质谱仪以及紫外光谱仪对其结构进行分析。首先通过对高分辨质谱的分子离子峰的分析，得到其分子量和分子式。然后从其红外光谱推测可能的基团。再用紫外光谱进行鉴定，最终得到该化合物的化学结构。将此分离得到的单体生物碱制备后进行临床实验，观察是否具有一定的药理活性，然后再进行进一步的研究。
通过本次实验，我的目的旨在掌握各种药学分析方法以及物质结构鉴定方法。能够熟练进行柱层析以及薄层层析和HPLC的实验操作，依据各种物质的不同化学性质选择合适的分离提取方法。还有各种化学物质的结构分析方法，熟练操作红外光谱仪，核磁共振仪和质谱仪对未知物质的分子结构进行推断，再应用紫外光谱仪对该化合物进行紫外吸收的鉴定，通过观察该物质的紫外特征吸收峰与推断出的结构是否相符来最终确定此物质的分子结构。
主要参考文献：
国产石杉科药用植物的分子生物学研究
[ 1 ] 王月娥, 岳东贤,唐希灿.石杉碱甲的抗胆碱酯酶的作用[ J] . 中国药理学报, 1986 , 7(2):110 -113 .
