开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一.背景
多不饱和脂肪酸作为一种独特的生物活性物质,对人体有重要的生理功能,omega;-3和omega;-6多不饱和脂肪酸都是合成类二十烷酸化合物的前体,它们在体内的平衡对于稳定细胞膜功能、调控基因表达、维持细胞因子和脂蛋白平衡、抗心血管病、促进生长发育等方面起着重要作用,是目前营养生化研究热点之一[1]。但由于不饱和脂肪酸的不饱和性,其化学性质不稳定,易发生过氧化作用,导致蛋白质和DNA损伤[2],在食品、化妆品、制药、生命科学和医学领域里,脂质过氧化已从基础化学和应用化学两方面展开了深入的研究.在大多数情况下,脂质过氧化会带来一些有害的影响,如机体的退化和中毒.例如,脂质过氧化的过程与生物体正常结构的紊乱和膜功能损伤有关.低密度脂蛋白的过氧化已被证实是动脉粥样硬化的引发阶段.目前,越来越多的人关注如何抑制脂质过氧化过程,并不断地研究各类抗氧化剂的作用和功能.从而导致神经退行性疾病和癌症等[3]。
在近几年的研究中,醛类化合物被认为与脂质过氧化导致的神经退行性疾病和癌症等疾病的发病机制有密切的关系,因此,可通过测定醛类化合物的种类和含量来间接反映脂质过氧化的程度,从而预测疾病的发生。但由于醛类化合物的挥发性和高反应性,且不具有能产生紫外和荧光的基团,因此直接测定醛类化合物的含量比较困难,可通过将醛类化合物和荧光试剂结合,利用高效液相对其含量进行分析。
荧光衍生作用是化学衍生作用的一种,荧光分子由两种波长确定其特性,即激发波长和发射波长,因此对于某一微量的荧光化合物即使同时含有大量各种非荧光化物也易于检出。某些情况下,荧光物质相互共存时,如果它们的特性波长有足够差异也有可能检出。两种波长的利用较一般的分光光度法增加了选择性;荧光分析的另一个特性是它有很高的灵敏度,一般为其他光吸收法(例如紫外吸收)灵敏度的100倍。而且荧光强度的线性响应较宽,约为浓度范围的104。在液相色谱法中,荧光检测器是一种高灵敏度、高选择性的检测器,比紫外检测器的灵敏度要高10到1000倍,因此,为了检测痕量非荧光物质,常将它与荧光衍生化试剂反应,生成荧光物质,然后用荧光检测器检测。但是液相色谱能分离的对象,多数没有荧光,主要依靠荧光衍生化试剂通过衍生化反应在目标化合物上接上能发出荧光的生色基团,达到荧光检测的目的。这些试剂必须满足的要求是:应能在比较缓和的条件下与被测物质快速定量地反应;生成的荧光衍生物应该有良好的稳定性;展开前或原位衍生化时产物与过量衍生化试剂必须能很易分离;色谱后衍生化试剂本身不应具有荧光。通常是用含有芳香环或杂环的大基团取代被测化合物分子中的一个或几个原子,以此将荧光物标记入分子,此时被测分子的结构基本不变。
但当用alpha;,beta;不饱和醛与荧光试剂反应时,得到的产物比较复杂,无法准确测定醛类物质含量,因此可将不饱和醛的碳碳双键先进行加成,再与荧光试剂反应,得到的产物比较专一,可进行含量测定。alpha;,beta;不饱和醛反应活性高,易与氨基、硫醇基团进行迈克尔加成,得到相应的饱和脂肪醛,因此可选用含有硫醇基的物质与alpha;,beta;不饱和醛进行加成,得到的产物与荧光衍生化试剂反应后进入高效液相色谱仪测定其含量。
二.实验方案
试剂和仪器:苄硫酚,丙烯醛,丁烯醛,戊烯醛,己烯醛,庚烯醛,辛烯醛,壬烯醛,O-取代羟胺类荧光衍生试剂,甲醇,磷酸,乙睛,蒸馏水;高效液相色谱仪,恒温混匀仪,高速离心机。
实验步骤:1.取适量己醛烯和苯硫酚在常温下进行反应,得到的产物加适量甲醇溶解,定容至10mmol/L,稀释10倍后使用;取适量O-取代羟胺类荧光衍生试剂,加适量甲醇溶解,定容至2.0mmol/L,稀释20倍后使用。
2.取配制好的溶液各10mu;L加入适量磷酸溶液(磷酸溶液的浓度和用量需要进行摸索),置于恒温混匀仪,进行反应(温度和时间条件需要进行摸索)。
